几种鱼类血液指标及不同器官消化酶活性比较.ppt

几种鱼类血液指标及不同器官消化酶活性比较 引言 鱼类消化酶主要有蛋白酶，脂肪酶和淀粉酶等几种，鱼类消化酶的活性随种类，生长阶段和健康状况的不同而有差异，同时受水体温度，盐度，无机离子以及饲料等因素的影响，鱼类消化酶研究可用于指导筛选饲料配方，开发新的饲料源和确立适宜养殖条件。 而鱼类的血液指标则包括血液生理指标和血液生化指标，生理指标包含红细胞数目，白细胞数目，血沉降值；血液生化指标包含血糖，血脂，血胆固醇。正常血液指标值能反映物种的属性和动物的生理状态。鱼类血液与其代谢、营养及健康状况有着密切的联系。 一.血样及酶液制备 血样制备：尾静脉采血，将血液分装于2支不同的离心管内，一支用肝素抗凝，4℃保存，用于血液生理指标测定；另一支不加抗凝剂，血液在室温凝结2h后，4℃，2000r/min离心10min。取上清于-80℃保存，用于血液生化指标测定。 酶液制备：将4种鱼置冰盘脊椎处死，取出胃、肝脏、肠等，剔除内容物及结缔组织，用预冷去离子水冲洗干净，于4℃下剪碎。按样品重的5倍加入PH7.0的冷冻去离子水，玻璃匀浆器匀浆，匀浆液4℃下以3000rpm/min的速率离心30分钟，收集上清液为消化酶粗酶提取液，置于4℃冰箱中保存，24h内检测酶活力。 二.血液指标的测定 血液生理指标测定： 1.红细胞计数 2.白细胞计数 3.红细胞沉降率 4.红细胞比容 血液生化指标测定： 1.血糖：邻甲苯胺法； 2.血清总脂：香草醛比色法； 3.血清胆固醇：邻苯二甲醛法。（试剂盒） 三.消化酶指标测定 1.蛋白酶活力测定 蛋白酶活力单位定义：在37℃下每分钟水解0.5%酪素产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位U。 蛋白酶的活力单位=A/15×F A为样品测得光密度查曲线得到相应酪氨酸的μg数；F为酶液最终稀释倍数；15为反应时间（min）。 2.淀粉酶活力测定 淀粉酶活力单位定义：在37℃、30min内，100ml酶液中的淀粉酶能完全水解淀粉10mg称为一个淀粉酶活力单位。 淀粉酶活力单位/100ml=（对照管光密度-测定管光密度）/对照管光密度×2/10×30/7.5×100/1=（对照管光密度-测定管光密度）/对照管光密度×80 3.脂肪酶活力测定 将分光光度计于420nm处以Tris缓冲液调零，1cm光径玻璃比色皿；然后将底物缓冲液在37℃预温5min以上。往相应编号试管中加入0.05ml新鲜血清，再用5ml加样器吸取4ml预温的底物缓冲液冲入试管中，迅速用冰箱保鲜膜盖住管口，立即颠倒混合5次。然后迅速倒入比色皿中在420nm处比浊，读取吸光度值（A1）。再将此比色液倒入原试管中置37℃准确水浴10min，再用上法比色读取吸光度值（A2）。最后取底物缓冲液4ml加0.9%氯化钠50μL，420nm比浊，读取吸光度值（As）。 脂肪酶活力计算方法：U=（A1-A2）/As*3632(单位U/L) As=0.681 四.结果探讨 1.鱼类食性对消化酶的影响 鱼类的食性一般分为肉食性、草食性和杂食性，它与消化器官组织结构和消化机能是相适应的，消化器官组织结构不同，所承担的消化机能不同，因而消化酶活性也呈明显差异。 一般肉食性鱼类的消化道短，蛋白酶活性强，草食性鱼类的消化道长，淀粉酶活性强。 蛋白酶活性从高到低顺序为：肉食性鱼类杂食性鱼类滤食性鱼类草食性鱼类；鱼类淀粉酶活性也明显与食性相关。 有什么样的食性，就有什么样消化酶的组成状况，而且消化酶活力大小变化程度与食物组成的变化程度是相关的，这正是鱼类对本身生态环境的一种适应。 2.鱼类自身生长阶段对消化酶的影响 随鱼体的生长，鱼需要营养成分的质与量也随之变化。消化器官随着生长相对增大，内分泌机能增强，从而使消化酶也随之相适应而变化。因而，由于季节不同、环境水温变化，鱼类表现出不同的生长速度。 3.血液生理指标 鱼类血液性状指标的高低与鱼类活动性及食性有关，活动性强的鱼类高于活动性弱的鱼类，肉食性鱼类高于草食性鱼类，草食性鱼类高于杂食性鱼类。 血液生化指标 本试验对四种鱼类血液的一些有机化学成分，如血糖、血总脂、血胆固醇等进行了初步的测定，结果可以作为它们正常生理常数参考值，而且这些指标观测值的变化指示了它们对环境改变的反应。 五.实验反思 1.实验材料比较单一 实验只选取了4种常见的肉食性经济鱼类作为研究对象，由于肉食性鱼类食物组成相似，导致实验数据差别不大，可比性不太强。 2.实验目的比较简单 实验只是简单测定了4种鱼类的血液指标和消化酶指标，可以适当增加一些实验条件，比如增加不同PH或温度梯度下鱼类的消化酶指标，也可以增加不同饲料对鱼类消化酶的影响。 六.感言 大学四年时光一晃就要过