基因枪法和农杆菌介导的Bt 抗虫基因转化芥蓝.pdf

2016（8）：21-28 中 国 蔬 菜 研究论文 CHINA VEGETABLES 基因枪法和农杆菌介导的 Bt 抗虫基因转化 芥蓝 陈长明　赵祥明　雷建军　曹必好　陈国菊 * （华南农业大学园艺学院，广东广州510642） 摘　要 ：以芥蓝品种小香菇为试材，分别采用基因枪法和农杆菌介导转化法将Bt抗虫基因Cry2Aa2 转化到芥蓝中，并对两 种转化方法进行了优化和比较。结果表明：基因枪法在轰击距离为6cm、轰击次数为1次时转化效率最高，为0.43%；农杆 菌介导转化法以带子叶下胚轴为外植体、预培养2d、侵染10min、共培养2d、抑菌培养5d后转入筛选培养基为最佳参数， 转化效率为0.37%。经PCR和PCR-Southern鉴定，基因枪法和农杆菌介导转化法均成功将目的基因导入芥蓝基因组中。经 抗虫性表型鉴定，T0 代转基因芥蓝植株对甘蓝夜蛾幼虫的抗性高于非转基因植株。 关键词 ：芥蓝；Bt基因；Cry2Aa2 ；基因枪法；农杆菌介导转化法 芥蓝（Brassica alboglabraL.H.Bailey）为十字 别致，营养丰富，含有多种硫代葡萄糖苷，其中萝 花科芸薹属一、二年生草本植物，原产于中国南部， 卜硫苷（glucoraphanin）尤为丰富，萝卜硫苷的降 是我国著名的特产蔬菜之一，主要以花薹为产品， 解产物萝卜硫素（sulforaphane）具有很强的抗癌功 幼苗及叶片也可食用。芥蓝肉质脆嫩、清香，风味 效（司雨等，2009；孙勃等，2011；Qianetal.， 2015）。近年来，由于芥蓝反季节栽培面积扩大， 陈长明，男，副教授，专业方向：蔬菜遗传育种与生物技术，E-mail： 在栽培过程中常常受到病虫为害，给生产造成很 cmchen@ *通讯作者（Correspondingauthor）：陈国菊，教授，博士生导师，专业方 大损失，因此培育抗病虫品种成为芥蓝育种的主要 向：蔬菜遗传育种与生物技术，E-mail：guojuchen@ 目标之一。常规杂交育种选育周期长，且难以找到 收稿日期：2016-02-02；接受日期：2016-05-20 抗虫材料，通过基因工程技术提高芥蓝抗虫性是一 基金项目：广东省教育厅特色创新项目（2014KTSCX026），广东省教 条快捷有效的途径。目前针对芥蓝转基因的研究较 育厅青年人才项目（2014KQNCX035），华南农业大学校长基金项目 （K13012） 少，浙江大学的黄科等（2007）利用农杆菌介导法 Research Review on Sowbane mosaic virus SoMV （ ） FENGLi-xia，ZHAOLi-rong，WUMu-tao，YUXuan Guangdong Inspection and Quarantine Technology Center Guangdong Key Laboratory of Import and Export Technical （      ，         Measures of Animal Plant and Food Guangzhou 510623 Guangdong China   ，   ，  ， ， ） Sowbane mosaic