家畜繁殖学6.2人工受精.ppt

三、稀释液的种类和配置 （一）稀释液的种类 1、现用稀释液 奶类和等渗糖类为主。 2、常温保存稀释液 用于常温保存精液，pH较低。 3、低温保存稀释液 用于低温保存精液，含有卵黄和奶类等抗冷休克物质。 4、冷冻保存稀释液 用于冷冻保存精液，含抗冻物质如甘油、DMSO 。 （二）稀释液的配制 1、各种成分的准备 （1）蒸馏水：现制、灭菌。 （2）化学药品：成分要纯净，溶解过滤后消毒，高温变性药品应用细菌滤膜过滤。 （3）奶类：新鲜，不含其它物质。于（90~95℃）水浴10min，去除奶皮。 （4）卵黄：取自新鲜鸡蛋，用前对蛋壳消毒。 （5）抗生素、酶类、激素、维生素等：于稀释液消毒冷却后加入。 2、配制稀释液注意事项（书P155） （1）所用物品认真清、消毒、干燥； （2）如配制液状稀释液，最好现用现配，不要长时间保存（预混除外）。 四、精液稀释方法与稀释倍数 （一）精液稀释方法 1、新采集的精液于30℃稀释，防止精子冷休克； 2、采精后及时检查、稀释，时间长后精子容易死亡； 3、稀释液与精液温度应该一致； 4、稀释时，将稀释液沿容器壁缓慢倒入精液，高倍稀释时分次进行； 5、稀释后立即镜检活力，以确保操作正确。 （二）稀释倍数 稀释倍数 = 稀释液的量/精液量 第五节 精液的保存Section 5 Semen Storage 现行的精液保存方式有三种： 常温保存（15-25 ℃） 低温保存（0-5 ℃） 冷冻保存（-79 ℃或-196 ℃）  一、常温保存（15-25 ℃），变温保存 1、原理：是利用一定范围的酸性环境， 抑制精子的活动，使精子保持可逆的静止状态而不丧 失受精能力。 2、稀释液： （1）能量物：如葡萄糖 ； （2）缓冲体系：如柠檬酸钠、碳酸氢钠 ； （3）抗生素：如青、链霉素等。 3、方法：隔水降温。 天热时，尽可能降低保存温度如放入水井、水缸， 天冷时，放在有暖气的室内。 二、低温保存（0-5 ℃） 1、原理：利用较低的温度来减弱精子的活动和代谢，从而延长精子的生命。 2、低温保存稀释液： 除室温保存液应具有的成分外（不充CO2），在牛用的稀释液还需用加卵黄或牛奶。 3、保存前的处理 （1）稀释分装：低温保存的精液通常用玻璃或塑料瓶分装，瓶内尽量不留空气，然后封口; （2）降温处理：通常按0.2℃/min降至保存温度; （3）保存方法：牛羊精液置于0~5 ℃，猪精液须特殊改造的冰箱或用泡沫盒内放冰块，精液用一块泡沫垫在上面；（看后图） （4）低温保存精液的利用：低温保存的精液在使用前应该用水浴升温至30℃。 4、液态精液的运输 （1）包装好、做好标记（种类、品种、畜号、时间）； （2）运输中避光、防震并保持温度。 三、精液冷冻保存(-79 ℃或-196 ℃) 定义：是利用液态氮（-196 ℃） 或干冰（-79 ℃） ，作为冷源，将精子和精液冷冻成 固体，并在液态氮或干冰中作超低温永久保存。 意义（熟悉）： （１）提高优良种♂的配种效能； （２）便于冷冻精液的自动化生产； （３）便于引种；　 （４）加快改良和育种； （５）推进繁殖新技术的应用； （６）建立动物基因库。 （一）精液冷冻保存原理 目前关于精液冷冻的原理普遍倾向于玻璃化 学说。 原理：利用超低温使精液和精子快速冷冻，快 速越过形成冰晶的温度范围（0-60 ℃）、精液 或精子中的水分不形成冰晶，而是形成玻璃化。 同时在抗冻剂的存在下使精子免受冻伤，在温度 上升至体温精液解冻后精子能够保持完整的形态 结构、功能和受精能力。 液态→固态 1、冷冻时细胞的损伤 冰晶：在0～-60℃低温区，缓慢降温条件下形成的，降温越慢，冰晶越大，-15～-25℃对精子危害最大。冰晶的形成对精子造成的机械损伤和渗透压损伤是引起精子死亡的主要物理因素。 玻璃化：在-60～-250 ℃超低温区，从冰晶化区域内开始，就快速降温，迅速越过冰晶化进入玻璃化阶段，此阶段对精子无害。 2、添加冷冻保护剂（甘油，DMSO等） 作用：增强精子抗冻能力，并对防止冰晶发生起到重要作用。 （三）精液冷冻保存技术 1、精液品质检查：活率0.8以上才能用于冷冻 2、精液稀释： 一次稀释：一次性将精液与稀释液和抗冻剂混合 两次稀释：低温下加入含有甘油的另一半稀释液 3、精液分装（目前多用细管分装） （1）颗粒精液（pellet semen）：约0.2ml一粒，似小黄豆大 （2）细管精液（straw semen)：0.25ml和0.5ml （3）安瓶和袋装：用于公猪和公马精液的冷冻 牛细管精液 4、降温和平衡 （1）降