猴头菌高密度发酵工艺的研究开题报告.pptx

开题报告猴头菌高密度发酵工艺的研究指导教师：王迪项目负责人：安升淑项目组成员：肖子建、毛海波、董麟目录一、立项目的二、技术路线三、研究内容四、项目特色五、项目完成预期成果目录一、立项目的二、技术路线三、研究内容四、项目特色五、项目完成预期成果立项背景猴头菌多糖能提高自然杀伤细胞的活性、促进迟发型超敏反应（DTH）的发生，能增强巨噬细胞的吞噬细胞。猴头菌提取物颗粒(tteriacium extract granules，HEG)能显著降低老年人服用过量非甾体类药物所致胃黏膜损伤，促进溃疡愈合 。目前HEG治疗慢性萎缩性胃炎在临床上已取得了满意的效果立项目的本研究首先采用物理化学结合方法对猴头菌株进行诱变选育，筛选得到细胞内多糖含量较其他菌株明显高的高产菌株，在此基础上，对培养基的组分和配比进行优化以便获得猴头菌高产菌株最佳发酵培养条件，使菌丝体产量进一步提高；并对猴头菌菌株胞内多糖进行提取纯化立项意义实现利用豆粕为氮源优化猴头菌发酵工艺，实现猴头菌产业化生产，为其它的大型真菌类中药（比如灵芝、云芝、松茸等）开发提供很好的范例分离和筛选猴头菌，提高其大规模发酵生产工艺，降低生产成本，缩短生产周期，为人们提供物美价廉的产品填补低成本、大规模液体发酵生产猴头菌菌粉及其替代品在吉林省的空白。带动大型真菌类中药资源的科学开采，深度开发。目录一、立项目的二、技术路线三、研究内容四、项目特色五、项目完成预期成果蜜环高产菌株技术路线：摇瓶发酵培养基优化 单因素实验、pb设计、最陡爬坡试验、bb设计摇瓶发酵培养条件优化单因素实验、pb设计、bb设计10L发酵罐发酵工艺优化pb设计、单因素实验100L发酵罐放大验证蜜环菌发酵产物基因鉴别多成分含量快速分析及测定蜜环菌菌丝体菌粉制备工艺菌粉质量标准建立目录一、立项目的二、技术路线三、研究内容四、项目特色五、项目完成预期成果研究内容主要有高产猴头菌株发酵工艺开发、菌粉制备工艺的开发、高产猴头菌株检验方法建立。本课题组研究内容分为以下几方面：10L及100L发酵工艺优化研究建立100L发酵工艺参数。高产猴头菌发酵水平测定建立高产猴头菌株胞内多糖检验方法，制定猴头菌菌粉的含量限度指标及检验方法。摇瓶发酵培养基优化碳源浓度筛选以种子培养基为初始培养基。以食用葡萄糖为碳源，分别考察碳源浓度为10g/L，15g/L，20g/L，25g/L，30g/L。其它成分固定，进行发酵培养，以筛选最优碳源浓度。发酵条件为：种龄为5d，接种量为4%，装液量为500mL的摇瓶装200mL，培养温度26℃，摇床转速为150rpm，培养时间为5d。氮源浓度筛选采用筛选出的最适碳源浓度，以食品级豆粕粉为氮源，分别考察氮源浓度为20g/L，25g/L，30g/L，35g/L，40g/L，而其它成分不变进行发酵培养，筛选最适氮源浓度。无机盐和微量元素筛选在筛选合适碳氮源的基础上，分别在培养基中加入以下无机盐离子：0.01 mmol/l，0.05 mmol/l，0.1 mmol/l，0.2 mmol/l，0.5 mmol/l的K+，Na+，Zn2+，Fe2+，Mg2+和0.01% VB1。进行发酵培养后测定D值，筛选最适无机盐离子。摇瓶发酵培养条件优化温度对发酵的影响将猴头菌株接种于优化发酵培养基中，分别置于24、26、28、30和32 ℃培养，5d后参照2.2的方法进行有效含量提取与检测，每组设2个重复，求平均值，以确定最优的发酵温度。转数对发酵的影响分别配制发酵培养基并接种，于2.4.1中优化的温度下进行培养，分别采用0、50、100、150、200和250 rpm的恒温摇床中培养，5d后参照2.2的方法进行有效含量提取与检测，每组设2个重复，求平均值，以确定最优的发酵转数。初始接种量对发酵的影响分别按照体积分数为2%、4%、6%、8%和10%接种量接种于优化培养基中，摇床培养，5d后参照2.2的方法进行有效含量提取与检测，每组设2个重复，求平均值，确定接种量。摇瓶发酵培养条件优化采用部分因子实验筛选对发酵影响显著因素采用部分因子实验设计，筛选对猴头菌发酵能力影响显著的因素。验证试验用最优的培养条件方案进行3次平行验证实验，以确定模型和优化方法的可靠性和准确性。高产猴头菌10L罐发酵工艺的研发Plackett-Burman 设计实验 首先通过 Plackett-Burman 设计实验初步筛选培养条件中对于有效成分含量影响显著的因素。以温度、通气量、装液量、转速、种龄、初始 pH、接种量和发酵时间为实验因子，进行10因素2水平的Plackett-Burman设计实验。其中，发酵培养基配方按照2.3优化的结果配制。F检验检验模型显著性，t检验检验模型各项系数显著性，同时筛选出显著影响有效成分含量的培养基成分。单因素实验 通过Plackett