第二章 微生物与纯培养.ppt

四、单细胞（单孢子）分离法 采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法。该方法要在显微镜下进行。 毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。 显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获得纯培养。 小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。 适应于高度专业化的科学研究 五、选择培养 为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可以根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养的方法进行分离。 1、利用选择培养基进行直接分离 2、富集培养 1、选择平板培养 根据微生物的特点，在培养基中加入一些抑制剂，使不需要的菌不生长，需要的菌生长后有一定特征，然后挑取单菌落。 分离抗生素抗性菌株，可在加有抗生素的平板上分离。 分离蛋白酶产生菌，可在培养基中加入牛奶或酪素，蛋白酶产生菌在平板上生长会形成透明的蛋白质水解圈。 2、富集培养 主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，更容易从混杂的群体中分离到特定的微生物。 富集条件可从多方面选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等等。 例如：分离产芽孢细菌，可以对样品进行高温处理，然后再进行培养。 保证菌种经过较长时间后仍保持生活能力，防止被杂菌污染，形态特征和生理形状尽可能不发生变异。 基本要求： 用于长期保藏的原始菌种称为 保藏菌种或原种（stoch culture）。 六、微生物的保藏技术 菌种保藏的原理 首先，要挑选典型菌种的优良纯种，最好采用它们的休眠体进行保藏。 其次，创造一个使微生物代谢不活泼、生长受抑制的环境条件（低温、干燥、缺氧、避光、缺少营养）。 再次，添加保护剂或酸碱中和剂，避免保藏过程中细胞受伤。 菌种保藏的方法 一种良好的菌种保藏方法 保持原菌的优良性状长期稳定 方法的通用性 操作的简便性 设备的普及性 优点：方便，不受条件限制，各类微生物均可。 缺点：时间短、传代多、易退化。 低温可减缓生长速度，单细胞仍有一定的活动条件，一般4～6个月必须传代一次。 ①斜面低温保藏法方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。 1、传代培养保藏方法 ②石蜡油低温保藏法： 操作方法： 生长完全的斜面上覆盖无菌的液体石蜡，液面高于斜面1cm，普通冰箱保藏。 原理：在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡， 达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态， 同时石蜡油还防止水分蒸发， 在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。 优点：保藏时间1～2年，方便，除石油发酵微生物外， 各类微生物均可。 缺点：时间短、传代多、易退化。 衰退 1. 定义 衰退（degeneration）是指由于自发突变的结果，而是某物种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 菌种的衰退是发生 在微生物细胞群中的一个由量变到质变的逐步演化过程。 菌种原有的典型性状变得不典型时就称菌种退化，这种变异也称负变（minus mutation）。 影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异； b）污染； c）死亡； 例如， 微生物菌落形态或个体形态的变化； 生长速度缓慢，产孢子量减少； 色素产生情况的变化； 研究菌种遗传标记的丢失， 生产菌种生产性状的劣化等。 2. 衰退的原因 造成菌种退化的主要原因是基因突变。 误区 生产工艺条件控制不当 杂菌污染 造成生产性能 下降 饰变 3. 衰退的防止 （1）选育生产性能稳定的菌株作为生产菌株 经诱变等处理后的菌种要连续传代、分离纯化，防止分离回复。 （2）控制传代次数 尽量避免不必要的移种和传代，并将必要的传代降低到最低限度，以减少自发突变的几率。 （3）创造良好的培养条件 创造一个适合原种的生长条件，就可在一定程度上防止菌种衰退； 例如，给予营养缺陷型适当的营养必需成分，可降低回复突变频率。 微生物学 第二章微生物的纯培养和显微技术 基本概念 1、微生物的纯种分离： 将多种混杂的微生物，经某种技术或方法分离或纯化的过程。 2、微生物的培养物（culture)： 在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体。 纯培养物（pure culture)：在人为规定的条件下培养、繁殖得到的只有一种微生物的培养物。 3、菌落（colony): 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定