细菌检验技术课件.ppt

（六）七叶苷水解试验 1、原理：某些细菌可以分解七叶苷 七叶苷 葡萄糖+七叶素 黑色沉淀 2、培养基：七叶苷培养基 3、结果： 培养基黑色：+ 培养基不变色：- 4、应用：D群链球菌和其他链球菌的鉴别 Fe2+ 二、蛋白质类代谢试验 靛基质试验 硫化氢试验 尿素酶试验 苯丙氨酸脱氨试验 氨基酸脱羧酶试验 （一）靛基质试验 原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 培养基：蛋白胨水 试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛） 结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+ 培养基液面为黄色：－ 应用：用于肠道杆菌的鉴定 （五）培养基 培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。 1、培养基的成分及作用 营养物质：肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐 水 凝固剂：琼脂、明胶 抑制剂 指示剂 2、培养基的种类 （1）按培养基的物理性状分类 液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。 半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。 固体培养基：含2％～2.5％琼脂，多用于细菌的分离培养。 （2）按培养基的用途分类 基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA） 选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板 增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。 厌氧培养基：用于培养厌氧菌 3、培养基制备的一般程序 调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装 灭菌 检定 培养基灭菌 ★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟 ★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌 保存 二、细菌接种与培养技术 （一）无菌技术 1、细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。 2、无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 3、细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 4、无菌试管、烧瓶、吸管的使用 5、标本的采集 6、废弃物的处理 8、个人防护 （二）细菌接种与分离技术1、细菌接种的基本程序 灭菌接种环 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境 2、细菌接种法 （1）平板划线接种法： 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 方法： 1）分区划线法：适用于含菌量较多的标本 2）连续划线法：适用于含菌量较少的标本 分区划线法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 连续划线法 （2）液体培养基接种法 （3）穿刺接种法 :用于观察细菌动力 （4）斜面接种法 （5）倾注培养法:用于细菌计数 （6）涂布接种法：见于药敏试验 （三）细菌的培养方法 一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱、化学法 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等 三、细菌的生长现象（一）细菌在液体培养基中的生长现象 混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌 细菌在液体培养基中的生长现象 （二）细菌在半固体培养基中的生长现象 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。 细菌在半固体培养基中的生长现象 有动力 现象 无动力 现象 （三）细菌在固体培养基中的生长现象 菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 菌 落 菌落与菌苔 第三节 细菌生化鉴定技术 细菌的生化反应：细菌具有各自独特的酶系统，因而在代谢过程中对底物的分解能力不同，所产生的代谢产物也不同，这些代谢产物各具有不同的生物化学特点，利用生物化学的方法来检验这些代谢产物，可用于鉴别和鉴定细菌，这种用生化反应测定方法称为细菌的生化反应。 一、碳水化合物的代谢试验 糖发酵试验 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） 甲基红试验 V-P试验 七叶苷水解试验 Β