不同电转仪的电转参数质粒用量和拓扑结构对猪胎儿成纤维-遗传.pdfVIP

Hereditas (Beijing) 2017 年 10 月, 39(10): 930 ―938 技术与方法 不同电转仪的电转参数、质粒用量和拓扑结构对 猪胎儿成纤维细胞转染效率的影响 1 1 1 1 1 1 1,2 钟翠丽 ，李国玲 ，莫健新 ，全绒 ，王豪强 ，李紫聪 ，吴珍芳 ， 张献伟1,2 1. 华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心，广州 510642 ； 2. 广东温氏食品集团股份有限公司，新兴 527400 摘要 : 为获得猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts, PFFs)最佳的电转染效率，本研究利用荧光激活细胞分 选技术(fluorescence activated cell sorting, FACS)辅助优化NEPA 21 和Nucleofector™ 2b 两种电转仪电转染PFFs 细胞的参数，比较不同质粒用量和拓扑结构在ECM® 830、NEPA 21 和Nucleofector™ 2b 中的转染效率。结果 显示：NEPA 21 电转PFFs 的最佳穿孔参数为脉冲电压200 V ，脉冲长度3 ms ，脉冲间隔50 ms ，脉冲次数3 次，脉冲电压衰减幅度 10%；Nucleofector™ 2b 在 U-023 的转染参数下达到最高转染效率。ECM® 830 和 Nucleofector™ 2b 的最适质粒用量都为10 μg，而NEPA 21 为8 μg；超螺旋质粒比线性化质粒的转染效率更高， 且3 种仪器中Nucleofector™ 2b 转染效果最佳。本研究综合考虑电转仪、电转参数、质粒用量和拓扑结构的影 响因素以优化PFFs 的电转条件，为高效制备转基因猪及基因编辑猪的研究奠定基础。 关键词 : 电转染；猪胎儿成纤维细胞；ECM® 830；NEPA 21 ；Nucleofector™ 2b Effects of parameters, plasmid dosages and topological struc- tures on transfection efficiency of porcine fetal fibroblasts using different electroporators 1 1 1 1 1 1 Cuili Zhong , Guoling Li , Jianxin Mo , Rong Quan , Haoqiang Wang , Zicong Li , Zhenfang Wu1,2, Xianwei Zhang1,2 1. National Engineering Research Center for Breeding Swine Industry, South China Agricultural University, Guanzhou 510642, China; 2. Guangdong Food Group Limited Company, Xinxing 527400, China Abstract : To obtain an ideal transfection efficiency of porcine fetal fibroblasts, fluorescence activated cell sorting (FACS) was used to optimize parameters for transfection of porcine fetal fibroblasts (PFFs) with ECM® 830, NEPA 收稿日期: 2017−03−06; 修回日期: 2017−04−07 基金项目: 国家转基因重大专项(编号：2016Z课题，广东省科技厅平台条件建设项目(编号：2013B070702003)和粤西“扬帆计划” 博士后人才扶持基金资助项目(