血糖的测定及激素对血糖浓度的影响.pptVIP

实验四血糖的测定及激素对血糖浓度的影响 一 实验目的 掌握GOD-POD法测定血糖的原理及方法。 观察胰岛素，肾上腺素对血糖浓度的影响。 了解动物实验的基本知识和兔耳缘静脉取血的方法。 二 原理 (2) 激素对血糖浓度的影响 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢被过氧化物酶（POD）催化释放初生态氧，氧又对与色原性氧受体4－氨基安替比林偶联的酚氧化，并与4－氨基安替比林结合生成红色醌类化合物。 二 原理 (2) 显色原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢被过氧化物酶（POD）催化释放初生态氧，氧又对与色原性氧受体4－氨基安替比林偶联的酚氧化，并与4－氨基安替比林结合生成红色醌类化合物。 葡萄糖＋O2+H2O GOD 葡萄糖酸＋H2O2 4－氨基安替比林＋酚＋H2O2 POD 红色醌类化合物 +4H2O 葡萄糖越多，生成的醌类物质就越多，颜色就越深，通过所讲过的比色法，求出它的葡萄糖含量，即血糖浓度。（标准管法） 三 操作 1．准备抗凝试管：首先放入试管一小勺抗凝剂（草酸钠）。 2．分组。称重：Kg，共有四只兔子，两只注射胰岛素，两只注射肾上腺素。兔子抓取方法：一手抓取颈部皮肤，另一只手托臀部，把它放在天平上称重。 操作 3. 注射前取血:一般多以心脏取血的方式进行。 操作 4．注射激素:抓住兔子，肚皮朝上，在腹部的皮下注射，注意要抓紧兔耳以免被咬住，方法是掂起皮肤，刺入皮下有落空感，然后缓慢注入激素。首先注射胰岛素0.75 mg/kg（注意记录时间）然后注入肾上腺素0.5 mg/kg，并记录时间。 5．制备无蛋白血虑液:这是注射前的血液，在胰岛素等待一个小时，肾上腺素等待半个小时期间制备注射前无蛋白血虑液。方法：蛋白沉淀剂4ml＋全血0.2ml混匀，室温放置7分钟后，在漏斗上过滤，这时标记为注射前无蛋白血滤液。 操作 6．注射后再次取血 7．再制备无蛋白血虑液:标记为注射后 8．比色：最后我们用标准管法来测定血糖浓度， 按表操作： 混匀，置37℃水浴15分钟调波长为505nm，以空白管调零，分别读取A测A标,根据标准管法求测定管血糖浓度。 加入物（ml） 测定管（注射前） 测定管（注射后） 标准管 空白管 去蛋白血滤液 0.5 0.5 处理后的葡萄糖 0.5 标准应用液 蛋白沉淀剂 0.5 酶酚混合试剂 3 3 3 3 四 结果与计算 C测（mmol/l）= （A测/A标）×5 mmol/L (5为葡萄糖标准应用液浓度值) 通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变化情况。 五 分析 (1) 对家兔而言血糖正常值：2.8－5.2 mmol/L，验证是否在此范围。 (2) 从实验结果来验证胰岛素降低血糖以及肾上腺素升高血糖的作用。