【精选】001植物细胞工程基础实验技术.ppt

总体要求 实验一植物细胞工程基础实验技术 一 实验目的 1、了解植物组织细胞培养条件与设施 2、掌握MS养基的配制方法 3、熟悉无菌操作的步骤为下次试验作准备 二 实验原理 MS培养基： 1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。 特点是无机盐和离子浓度较高 应用广泛 大量元素(母液Ⅰ)???????? mg／L NH4NO3????????????????????? 33 000 KNO3??????????????????????? 38 000 CaCl2·2H2O????????????? 8 800 MgSO4·7H2O????????????? 7 400 KH2PO4????????????????????? 3 400 母液Ⅰ为20倍浓缩液 此处配制300ml母液Ⅰ 微量元素(母液Ⅱ) mg／L KI?????????????????????? 166 H3BO3?????????????????????? 1 240 MnSO4·4H2O??????????????4 460 ZnSO4·7H2O??????????????1 720 Na2MoO4·2H2O??????????? 50 CuSO4·5H2O????????????? 5 CoCl2·6H2O????????????? 5 母液Ⅱ为200倍浓缩液 此处配制100ml母液Ⅰ 铁盐(母液Ⅲ) mg／L FeSO4·7H2O????????????? 5 560 Na2-EDTA·2H2O?????????? 7 460 母液Ⅲ为200倍浓缩液 保存在棕色玻璃瓶中 此处配制100ml母液Ⅰ 有机成分(母液Ⅳ) mg／L ⅣA 肌醇????????????????????? 20 000 ⅣB 烟酸?????????????????????? 100 盐酸吡哆醇(维生素B6)???????100 盐酸硫胺素(维生素B1)???????100 甘氨酸???????????????????? 400 母液Ⅳ200倍浓缩液 此处配制100ml母液Ⅰ 植物激素配制 MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6-苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质 0.1 mg/ml的2,4-D溶液： 取25 mg的 2,4-D，加入少量95%的酒精和1 N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250 ml 萘乙酸(NAA): 可用适量酒精溶解. 三 实验用品 1 .MS培养基粉剂、琼脂 、蔗糖、乙醇、氢氧化钠、盐酸、2,4-D 、萘乙酸(NAA)。 2 .材料：本实验以胡萝卜贮藏根 3.培养容器的准备：三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、封口膜、橡皮筋 4.电炉、pH试纸（或酸度计）湿热灭菌器 三 配制培养液 1、母液Ⅰ为50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取植物激素母液一定量，与各种母液一起放入烧杯中。 三种培养基:MS+2.0mg/L 2,4-D(根)(第1 2组各30瓶) MS+0.5mg/L NAA(茎)( 第3 4组各30瓶) 2、称取琼脂9 g、蒸糖30 g，放入烧杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状 3、再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL，搅拌均匀 4、调pH? 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH或HCl溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5.4～7.0)测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止 5、将烧杯中的培养基趁热倒入锥形瓶(50 mL或100 mL)中。培养基的量约为锥形瓶容量的1/5～1/4。 6 、封口膜封口,记号笔记录 注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。 四 思考及讨论 1，植物组织培养的理论基础是什么？ 2，培养基的成份主要有哪几类？ 本次需灭菌的物品 1培养基 2解剖工具 3滤纸 * * 遵守实验室各种规则 　　按要求使用对应的实验台，不可随意调换 　　珍惜学习时间，认真完成实验和实验报告 　　维护好实验室清洁和秩序 要求和注意事项 期终成绩＝平时考勤＋每次的实验成绩； 每次的实验成绩＝实验完成的实际情况＋实验报告。 课程成绩 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料和方法 四、实验结果 五、讨论 实验报告格式 1、不会写实验原理（乱抄乱写断章取义）。 2、实验现象、结果的叙述不清楚、不准确。 3、讨论没有主体，缺乏逻辑性 ，句子不完整。 4、作业没有