产蛋白酶菌株的筛选及产酶条件的优化.doc

题目： 学 院 ：生命科学学院 专 业： 生 物 姓 名：学 号：指导教师： 毕业设计（论文）时间：200年月—6月水解圈作为筛选模型,从附近农田土壤中筛选得到了产蛋白酶能力较高的细菌初步鉴定该菌株属于属关键词：菌种筛选，，，条件优化 ABSTRACT In order to screen a bacterium which can produce protease, milk hydroxylation circle was used as screening model in this paper. The bacterium whr1 was achieved by screening from the soil near the Shandong University of Technology, and were preliminarily identified belong to Bacillus. After the optimization of the condition, the capability of whr1 was improved, the optimal condition is: The time is 24h; carbon source is sucrose 1%; nitrogen source is Yeast extract 1.5 %, the pH is 6.0; fermentation temperature is 30℃; the appropriate load is 30mL culture medium in 250mL flask. Keyword: Screening，Identified，Protease，Culture optimization 目录中文摘要 I ABSTRACT II 目录 III 第一章 引言 1 1.1 微生物蛋白酶的分类 1 1.1.1 按照蛋白酶水解肽链的方式分类 1 1.1.2 按照蛋白酶的作用最适温度分类 2 1.1.3 按照蛋白酶的作用最适pH分类 3 1.1.4 按照蛋白酶的作用机制不同分类 3 1.2 微生物蛋白酶的分布 4 1.2.1 细菌 5 1.2.2 放线菌 5 1.2.3 真菌 5 1.2.4 病毒 6 1.3 微生物蛋白酶的优点 6 1.4 微生物蛋白酶的应用 7 1.4.1 在玉米加工中的应用 7 1.4.2 在食品工业中的应用 7 1.4.3 在动物饲料加工中的应用 7 1.4.4 在纺织行业中的应用 8 1.4.5 在洗涤剂中的应用 8 1.4.6 在皮革生产加工中的应用 8 1.4.7 在生产富含高营养注射用水中的应用 9 1.5 国内外蛋白酶的研究状况及其前景 9 1.6 本实验的研究目的与内容 9 第二章 实验材料与方法 - 11 - 2.1 实验材料与仪器 - 11 - 2.1.1 实验仪器 - 11 - 2.1.2 实验材料 - 11 - 2.2 实验方法 - 14 - 2.2.1 菌株筛选 - 14 - 2.2.2 革兰氏染色 - 15 - 2.2.3 芽孢染色 - 16 - 2.2.4 蛋白酶产生菌酶活力的测定 - 16 - 2.2.5 产酶条件优化 - 18 - 第三章 实验结果及讨论 - 20 - 3.1 实验结果 - 20 - 3.1.1 目的菌株的分离纯化 - 20 - 3.1.2 菌株的形态特征 - 21 - 3.1.3 蛋白酶酶活测定 - 21 - 3.1.4 不同培养时间对产酶的影响 - 23 - 3.1.5 不同碳源对产酶的影响 - 25 - 3.1.6 不同氮源对产酶的影响 - 28 - 3.1.7 培养基不同初始PH值对产酶的影响 - 30 - 3.1.8 不同温度对产酶的影响 - 33 - 3.1.9 不同装液量对产酶的影响 - 35 - 结论 - 38 - 参考文献 - 39 - 致谢 - 41 - 译文 - 42 - 第一章 引言 蛋白酶是水解蛋白质肽键的一类酶的总称皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产Porphyromonas gingivalis)中分离的脯氨酰三肽基肽酶，Hatanaka T等从链霉菌sp.TH-4中分离出的氨基肽酶N(TH-4AP)等；作用于羧基末端为羧基肽酶，如硫叶菌产生的耐热金属蛋白酶CPSso[5]等，对蛋白质分子而言，外肽酶的作用是有限的，内肽酶显然更宜于水解消化蛋白质[6]。 1.1.2 按照蛋白酶的作用最适温度分类 按作用最适温度不同，微生物蛋白酶可分为低温蛋白