帕金森病模型定稿课件.pptx

帕金森病动物模型;帕金森病又称震颤麻痹，是一种由于脑内黑质纹状体通路多巴胺缺乏所致的，在老年人中常见的进行性中枢神经系统退行性疾病。;;;;随着对儿茶酚胺特异性神经毒素六羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine，6-OHDA)的认识，在1968年Vngerstedt等人成功地建立6-OHDA动物模型。之后，于1983年Brundin等报道了利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)制作小鼠和猴的PD动物模型。;在国内，周厚广等用两点注射法将6-OHDA注入大鼠一侧的黑质及内侧前脑束，成功率高达71.1%，电镜观察可见中脑黑质神经细胞普遍存在变性坏死及不同阶段的凋亡改变，可以较快地建立稳定地成功率较高的类似于人类中晚期帕金森病行为和病理的大鼠模型。随着研究的深入，相继出现了NO、Fe3+及机械损伤的PD动物模型，根据研究目的的不同，选择不同的PD动物模型。;帕金森病动物模型的制备; （1）多巴胺能神经元在出生时数量及形态正常，青年时期开始逐渐选择性地减少，减少量超过50％，且容易通过神经化学和神经生理学的方法检测到； （2）模型应能容易检测其运动功能的损伤，包括运动迟缓、肌僵直和静止性震颤等PD的主要症状； ; （3）模型应能显示出路易小体的形成； （4）如果模型是遗传性的，应基于单一突变而使突变模型有着强大的传播能力； （5）模型应有相对较短的疾病周期（如数月），以使药物筛选得以经济、快速地进行。 ???;①通过在大鼠的黑质或内侧前脑束注射6羟多巴胺（6-OHDA） ②通过对模型动物(如:猴、小鼠、猪等)进行1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）的管饲法和立体定位注射等方法; 前者是较精典的模型制备的方法，也是在国内较早开展的，但是由于神经元的毁损出现的较早，这与临床PD病人的中脑黑质多巴胺能神经元的渐进性死亡不同； 近距离的毁损很难把握毁损的程度，这使得采用这种方法获取部分损毁的模型的成功率很低；;较之前者采用MPTP管饲法和立体定位注射方法，在国内最近几年才运用到帕金森动物模型的制备，国外已经利用MPTP在猴和小鼠身上建立了较为理想的PD模型，制备通常采用皮下、静脉、腹腔注射和肌肉给药，具有方法可靠且重复性较好。但是其危险性较高，对于试验人员和试验条件有着严格的要求;模型制备;应用6-OHDA制备偏侧PD鼠模型;应用MPTP制备PD动物模型;小鼠PD模型;利血平主要可以通过抑制去甲肾上腺素能神经元末梢的再摄取功能，使囊泡内贮存的多巴胺(DA)及其他的儿茶酚胺类递质耗竭。将雄性Wistar大鼠(体重280—300g)腹腔内注射一定剂量的利血平后可使其出现骨伤肌慢硬、震颤、身体屈曲、运动过少以及其他的一些运动症状。神经化学分析发现大鼠纹状体内DA和其他单胺类递质的含量明显减少;它存在明显的不足：一是药物注射造成的运动障碍在不同时间和不同个体之间变异性较大；二是利血乎同时引起了多种递质释放并且无法造成类似PD的病理改变。因此该模型的应用只局限于探索药物影响肌僵状态的实验中，对其他的运动症状的研究现已很少应用;1991年Ben-Shachar在雄性SD大鼠(250~300g)单侧黑质内注射Fe3+三周后可使其出现明显的运动行为改变，表现为在新环境中自主运动减少，短暂的僵直症状及自发的同测旋转行为。;研究发现机械损伤内侧前肋束(MF可以造成黑质内的DA能神经元进行性死亡。已经建立的造模方法有MFB独突切断术和中脑半切术，尤以前者应用较多。;用该方法造模有如下优点： ①成功率高，较为经济。 ②黑质DA能神经元呈现渐进性死亡，可以模拟PD病理变化的全过程，对于研究神经元的再生和PD的预防有一定的意义。 缺点是切断术后短时间内，损伤的程度不稳定。;6-OHDA大鼠模型： 在注射6-OHDA后连续6周进行行为学检测，用阿朴吗啡腹腔注射，1～5分钟后出现旋转,旋转时以健侧后肢为支点,身体向健侧弯曲,首尾相接,原地转动。有的甚至出现翻转,有的呈小环行旋转，速度7r/min视为成功模型。通过旋转记录仪计算一定时间内旋转的总次数，可以粗略估计大鼠脑内DA能神经元的死亡程度。;MPTP致灵长类PD模型： 腹腔注射或静脉注射MPTP第2天，动物即出现自发性运动减少，呈进行性加重，以至于运动不能，弓背姿势，四肢紧张性弯曲，肌强直伴震颤，吞咽困难，不能进食及发音减弱。;MPTP小鼠模型： 爬杆实验：将一直径为25cm的软木小球固定于一根长50cm、粗1cm的木杆顶部,木杆上缠上纱布以防打滑，然后将被测小鼠放到小球上，并记录以下时间：小鼠从小球上下来所需的时间，小鼠爬完秆子的上半部和下半部所需的时间。; 游泳实验：将受试小鼠放入一个20×30×20cm