氯霉素滴眼液含量测定方法验证.doc

氯霉素滴眼液含量测定方法验证 巴红娟，王红然，刘士峰 （石家庄格瑞药业有限公司，河北 石家庄 050801） 【摘 要】参考中国药典2010年版氯霉素滴眼液含量测定方法，对HPLC梯度洗脱时间程序进行调整并进行方法验证，结果表明该方法分离度好、准确度高。 【关键词】氯霉素滴眼液；高效液相色谱法；含量 1 材料与方法 1.1 仪器 液相色谱仪：SHIMADZU LC-20A；色谱工作站：Lcsolution；检测器：SPD-20A紫外检测器。 试剂 庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸等均为分析纯；甲醇为色谱纯；氯霉素对照品（批号：130555-200602）、氯霉素二醇物对照品（批号：130436-200704）、对硝基苯甲醛对照品（批号：130562-200902）、羟苯乙酯对照品（批号：100847-200501）均由中国药品生物制品检定所提供；氯霉素滴眼液由本公司车间提供。 色谱条件 色谱柱：SHIMADZU VP-ODS（250mm*4.6mm，5μm）；流动相A：0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾6.8g，用0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000ml，再加三乙胺5ml，混匀，用磷酸调节pH值至2.5），流动相B为甲醇；检测波长为277nm，按下表进行线性洗脱。 表1 时间程序表 时间（分钟） 流动相A(%) 流动相B（%） 0 62 38 20 62 38 40 43 57 55 62 38 60 62 38 1.4 系统适用性测试 取氯霉素二醇物对照品、对硝基苯甲醛对照品、氯霉素对照品、羟苯乙酯对照品各适量，加甲醇适量（氯霉素每10mg加甲醇1ml）使溶解，用流动相A-B（68:32）定量稀释制成每1ml中含氯霉素0.25mg、氯霉素二醇物20μg、对硝基苯甲醛1.5μg、羟苯乙酯25μg的混合溶液20μl注入色谱仪，记录色谱图。 图1 系统适用性测定图谱 表2 系统适用性测定结果 保留时间（min） 峰面积 拖尾因子 理论塔板数 分离度 氯霉素二醇物 9.835 1321753 1.171 11621.502 --- 对硝基苯甲醛 15.880 152613 0.903 3161.018 8.088 氯霉素 17.447 1.095 12981.438 1.799 羟苯乙酯 35.241 1395143 1.014 58685.111 29.795 1.5 对照品溶液的配制 精密称取25mg氯霉素对照品置50ml量瓶中，用流动相A-B（62:38）溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml上述溶液至10ml量瓶中，用流动相A-B（62:38）稀释至刻度，摇匀即得。 供试品溶液的配制 精密量取本品1ml（8ml:20mg）置50ml量瓶中，用上述流动相稀释至刻度，摇匀即得。 2 结果 2.1 专属性试验 取除氯霉素外的其他各辅料，按处方比例称取，加水溶解后摇匀，作为空白溶液，按“1.6”项下方法制备空白供试品溶液，进样20μl，结果表明：辅料对氯霉素含量测得无干扰。 2.2 线性关系考察 精密称取25.0mg氯霉素对照品置50ml量瓶中，加流动相A-B（62:38）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液，精密量取0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml对照储备液至10ml量瓶中，用上述流动相稀释至刻度，摇匀，各精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积积分值（Y）与进样浓度（X：μg/ml）进行线性回归，回归方程为Y=50356.91X-9470.5，r=0.9998（n=5）。结果表明：氯霉素进样浓度在60-140μg/ml范围内，与峰面积线性关系良好。 2.3 精密度试验 精密吸取线性3号液20μl，重复进样6次，测得峰面积R