苜蓿青贮饲料中优良乳酸菌菌株的筛选.pdf

牧草 2014·11/12 SPECIAL ISSUE FOR FORAGE 专辑 苜蓿青贮饲料中优良乳酸菌菌株的筛选 李旭娇，玉柱 （中国农业大学草地研究所，北京  100193） 中图分类号：S823.4 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2014）11/12-0037-04 摘 要 ：本研究从苜蓿（Medicago sativa L.）青贮饲料中分离得到若干株乳酸菌，对所有菌株进行生长曲 线和产酸速率测定，发现其中8个菌株产酸速率较快，能于24h内将培养基pH值降至4.0以下。根据形态、 生化鉴定及16S rDNA同源性序列分析，鉴定4株为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum ），2株为戊糖片球 菌（Pediococcus pentosaceus ），1株为类植物乳杆菌（Lactobacillus paraplantarum ），1株为副干酪乳杆菌 （Lactobacillus paracasei ）。通过适当的工艺处理其有望作为乳酸菌添加剂单独或混合添加入青贮中以提高青 贮饲料品质。 关键词：青贮；乳酸菌；筛选 [1] 培养箱、尼康生物显微镜80i、超净工作台、高压蒸气 乳酸菌制剂是青贮制作中常用的生物添加剂 。牧 草表面附着乳酸菌数量往往较少，不能满足青贮所需[2]。 灭菌锅、旋涡混合器。 乳酸菌制剂的使用可增加青贮初期发酵时的乳酸菌数 1.3 培养基与试剂 量，对保证青贮饲料尽快进入乳酸发酵阶段非常有效， MRS固体培养基：酪蛋白胨10.0g，牛肉提取物 从而使pH值迅速下降，蛋白水解作用减弱，青贮饲料 10.0g，酵母提取物5.0g，葡萄糖20.0g，乙酸钠5.0g， 中氨态氮含量减少[3]。国外关于青贮用乳酸菌制剂的研 柠檬酸二铵2.0g，Tween80.1mL，K HPO .2.0g， 2 4 究比较成熟[4,5]，但国内的研究主要集中在应用方面和实 MgSO ·4HO.0.25g，琼脂15.0g，蒸馏水1.L，pH值 4 2 验室分离鉴定阶段，较少进入市场流通并广泛应用[6,7]。 6.2~6.5，121℃灭菌15.min。 本研究旨在提取出优质的乳酸菌菌株从而为青贮实践提 产酸培养基采用MRS液体培养基（MRS固体培养 供一定的技术指导。 基中不加琼脂即可）。革兰氏染色液由北京奥博星生物 技术有限责任公司提供。H2S产生试验、硝酸盐还原试 1 材料与方法 验、耐酸耐盐试验及各种碳水化合物水解试验的培养基 1.1 青贮饲料样品 等均购于浙江省杭州天和微生物试剂有限公司生产的细 两个样品分别来自不同的苜蓿青贮，南疆地域的标 菌微量生化反应管。细菌基因组DNA提取试剂盒（离心 为N，图牧2号的标为TII。 柱形）DP302购自北京天根生物技术有限公司。 1.2 仪器设备 1.4 试验方法 精密pH计PHS-2F、722-分光光度计、电热恒温 1.4.1. 乳酸菌的分离纯化 在无菌条件下称取苜蓿青贮