南通小方柿乙醇脱氢酶基因DkADH1的克隆及表达分析.pdf

园 艺 学 报 2014 ，41 （10）：2001 –2011 http ：// www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail ：yuanyixuebao@126.com ‘南通小方柿’乙醇脱氢酶基因DkADH1 的克 隆及表达分析 陈小云，张仕杰，屠煦童，李宁宁，章 镇，渠慎春* （南京农业大学园艺学院，南京 210095 ） 摘 要：以‘南通小方柿’果实为材料，采用同源克隆的方法，获得了柿乙醇脱氢酶基因DkADH1 ， 其全长为 1 377 bp，开放阅读框为 1 137 个核苷酸，编码 379 个氨基酸，具有 ADH 基因典型的结构域和 功能域，与番茄、苹果等双子叶植物亲缘性较近。以‘南通小方柿’不同组织为材料，采用 qRT-PCR 方 法对 DkADH1 及单宁生物合成途径中的相关基因的表达进行分析，同时测定了不同时期果实的单宁含量， 结果表明在果实发育过程中，可溶性单宁含量逐渐降低，而不溶性单宁含量不断升高；DkADH1 基因在 茎、叶、花、果实等器官中均有表达，在果皮中表达量最高。随着果实的成熟，DkADH1 表达量总体呈 上升趋势。柿果实中单宁合成途径中的相关基因 DkF3 ′5′H 和 DkMYB4 随着乙醇处理果实时间的延长表达 量呈下降趋势，推测‘南通小方柿’DkADH1 能够抑制单宁合成相关基因的表达，从而降低果实可溶性 单宁含量。 关键词：柿；DkADH1 ；克隆；基因表达 中图分类号：S 665.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2014 ）10-2001-11 Isolation and Expression Analysis of DkADH1 Gene from ‘Nantong Xiaofangshi ’Persimmon * CHEN Xiao-yun，ZHANG Shi-jie ，TU Xu-tong，LI Ning-ning ，ZHANG Zhen ，and QU Shen-chun （College of Horticulture，Nanjing Agricultural University ，Nanjing 210095 ，China） Abstract ：An alcohol dehydrogenase 1 （ADH1 ）gene named DkADH1 was cloned from ‘Nantong Xiaofangshi ’persimmon fruit using homology gene clone method. The results showed that the full-length of DkADH1 gene was 1 377 bp and the open reading frame （ORF ）of DkADH1 was 1 137 nucleotides which encoded 379 amino acids. It has structure domain and function domain of the typical ADH gene. The phylogenetic tree analysis of the evolutionary relationship of ADH between different species indicated that DkADH1 was gathered dicotyledonous plants ，which closed to Solanum lycopersicum and Malus × domestica. qRT-PCR was used to analyze the expression