药品生物活性检定技术.ppt

第三章 药品生物活性检定技术第一节 概 述 教学目标: 1、掌握生物测定的特点、生物反应类型与熟知减少生物差异性的方法与措施。 2、了解剂量和反应的关系。 3、学习肝素、绒促性素生物检定法 讲授新课：第一节 概 述 生物测定技术的一个主要用途是用于测定理化方法不测定其效份的一部分药品的生物活性，其机理是利用药物的剂量和药理作用在一定范围内存在着量-效关系，即剂量增大，药理作用随着增强。将剂量和反应经过适当数学转换后，量-效关系可以转化为以反应或其函数为纵坐标，剂量或其函数为横坐标的直线关系。这就是生物测定实验设计的基础。 由于生物差异的存在，生物测定结果误差较大，重现性较差，需要控制的条件较多，加上测定费时，计算繁琐。所以，生物测定主要用于无适当理化方法进行检定的药物，补充了理化检验的不足。随着科学技术的发展及新药的不断发现，一些品种的生物测定法可能被理化检验代替，而一些新药的生物测定技术方法又在不断建立，因而生物测定技术总是在不断吸收新技术、新内容而发挥新的作用。 《中国药典》(2005年版)收载了肝素、绒促性素、胰岛素、缩宫素、硫酸鱼精蛋白、精蛋白锌胰岛素、卵泡刺激素、黄体生成素、降钙素、生长激素、升压素、洋地黄12个品种采用生物测定技术的方法来测定其生物活性（效价）。药品生测必备的实验动物的捉拿与注射方法。 一、生物测定的特点： 三、生物反应类型 　在选用反应指标时，应考虑反应的专属性及检定结果的精密度，一般要注意以下几点： 　(1) 同质反应的剂量范围要宽　生物测定必须在同质反应基础上进行，而药物同质反应一般都有一定的剂量范围，超出了一定的剂量范围，反应性质可能发生变化。 四、剂量和反应的关系 　　生物测定是利用药物不同剂量引起生物体反应程度的变化以进行药物效价测定的，要计算效价，首先要研究剂量和反应之间的关系。许多药物在相当宽的剂量范围里，剂量和反应之间存在着一定的规律性，并可用一定的数学公式表示，研究剂量和反应关系，基本内容就是找出这个规律，并采用坐标转换的方法解决曲线转换为直线的问题，以便用最简单的方法进行统计处理。通常以剂量作横坐标，反应为纵坐标，在方格纸上划点连线，由所成的剂量－反应曲线形状推断剂量或反应应作何种函数转换,直至剂量－反应线在一定范围内成直线。剂量－反应线的斜率对检定结果有重要意义，斜率越大，表明反应对剂量变化越敏感，实验结果就越精密可靠。 由于生物差异及测定误差的存在，剂量和反应的数学关系只是一个粗略的近似关系，二者仅在实验数据范围内才可靠，不可用外推法去估计实验结果，否则将得出错误的结论。 量反应中剂量与反应的关系 　　(1) 对数剂量与反应成直线关系 　在一定剂量范围里，很多量反应与剂量的关系是一条先锐后钝的曲线，很象对数曲线，此时如将计量转换为对数剂量，即可成一直线。 　　(2) 对数剂量与对数反应呈直线关系 大部分“时”反应中，剂量－反应曲线为先钝后锐的曲线，当将剂量和反应均转换为对数后，曲线转化为直线。属于这一类型的有肝素家兔全血法等。 　(3) 坐标转换的其他方法 　① 将反应值转换为平方根或立方根，这种转换也能不平衡地缩小反应值，缩小作用与对数最强，立方根次之，平方根最弱，因此开方转换适用于幅度较小的曲线；属于这种转换的有促皮质素小鼠胸腺法等。 　② 有时可将反应转换为倒数（1／y），使曲线直化，常用于时反应。 　③ 对数坐标轴的上、下、左、右移动，本法适用于经对数转换后，起点部分仍有弯曲的情况，移动距离应试探后确定。 第三节 肝素生物测定技术 肝素系由健康牛、猪、羊等食用动物的肺、肝、肠粘膜中提取的一种粘多糖。 肝素的主要药理作用为抗凝血作用，能延长凝血时间。分子量为6000～20000。 肝素的效价测定方法虽有化学检验法，紫外分光光度法等，因测得的效价常常不能和生物效价一致，因此仍以生物测定为主。其原理是根据肝素具抗血凝的药理作用，同时在体外也有抗凝血作用而建立的。《中国药典》(1977)用新鲜兔血量反应平行线测定,1985、1990、1995、2000、2005年版药典除沿用该方法外，又增加兔猪血浆为实验材料。该法是比较肝素标准品(S)与供试品(T)延长兔新鲜血或兔、猪血浆凝结时间的作用，以测定供试品的效价。 一、测定前标准品、供试品与血浆的配制与制备 （三） 供试品溶液与稀释液的配制 按供试品的标示量或估计效价(AT)，照标准品溶液与稀释液的配制法配成高、中、低(dT3、dT2、dT1)三种浓度的稀释液。相邻两浓度之比值(r)应与标准品相等，供试品与标准品各剂量组的凝结时间应相近。 （四） 血浆的制备 迅速收集兔血或猪血置预先放有8％枸橼酸钠溶液的容器中，枸橼酸