0015微生物限度检查计数培养基适用性操作规程.doc

微生物限度检查计数培养基适用性操作规程 一、目的：建立微生物限度检查计数培养基适用性的标准操作规程。 二、范围：本标准规定了微生物限度检查计数培养基适用性要求；适用于本公司检品微生物限度检查计数培养基适用性。 三、职责：检验员对本标准的实施负责 四、依据：《中国药典》2015年版四部（通则1105） 五、内容： 1 试验用具： 1.1 托盘天平、生物安全柜（BSC-1000Ⅱ）、电热恒温培养箱（HH.BII.500-S）、层流超净工作台（S.SW-CJ）、电热恒温干燥箱（GZX-DH.600-Ⅱ）、霉菌培养箱（MJ-160B型） 1.2 锥形瓶（250～300ml、500ml内装玻璃珠若干）、培养皿（9cm）、量筒（100ml，500m1）、试管（18mm×180mm）及塞、吸管（1m1分度0.0l，10m1分度0.1）、注射器（20ml或30m1）、涂布棒、注射针头、玻璃消毒缸（带盖）、不锈钢桶（带盖）。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管筒内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加棉塞或硅胶塞，若用振荡器制备混悬液时，尚需用玻璃纸包裹瓶塞，以免振荡时供试液污染瓶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于160℃干热灭菌2h或高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干备用。? 1.3 ??用具??大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70％～75％乙醇溶液浸泡）。无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。? 1.4 接种环（白铱金或镍铬合金，环径4～5mm、长度6～10cm）、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌镊子、灭菌钢锥、灭菌称样纸、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗手盆、陶瓦盖（12cm）、实验记录纸等。 2 试液? 2.1 0.1％苯扎溴铵溶液或其他适宜消毒液（供洗手、擦拭操作台面用）。? 2.2 5％石碳酸溶液（配好后装入玻璃消毒缸内，供消毒带菌吸管用）亦可选用其他适宜消毒液。 2.3?? 75％乙醇溶液。? 2.4 ?碘酊或碘伏溶液 3 验证所需要的稀释剂的确认 稀释剂：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 4 验证所需文件的确认表 文件名称 文件编码 是否有效版本 文件保存处 《微生物实验室清洁消毒操作规程》 □是 □否 质量部 《培养基的管理制度》 □是 □否 质量部 《检定菌的保存、传代、使用、销毁规程》 □是 □否 质量部 《BSC-1000Ⅱ生物安全柜操作规程》 □是 □否 质量部 《HH．BII.500-S电热恒温培养箱操作规程》 □是 □否 质量部 《GZX-DH.600-Ⅱ电热恒温干燥箱操作规程》 □是 □否 质量部 《MJ-160B型霉菌培养箱操作规程》 □是 □否 质量部 检查人/日期： 复核人/日期： 5 验证项目和验证方法： 5.1 验证用菌株：（第 代） 铜绿假单胞菌〔CMCC（B）10104〕、金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕、枯草芽孢杆菌〔CMCC（B）63501〕、白色念珠菌〔CMCC（F）98001〕、黑曲霉菌〔CMCC（F）98003〕。 验证所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冻干粉菌株为0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证实验菌株的生物学特性。 5.2 菌悬液的制备： 分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24小时，分别挑取菌落接种加入PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7,制成不大于100cfu/ml的菌悬液备用。 接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3天，挑取菌落接种到PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，制成不大于100cfu/ml的菌悬液备用。 接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面上，20～25℃培养5～7天，直到获得丰富的孢子。加入3～5ml含有0.05%聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱，吸至无菌试管中，挑取菌落接种到含有0.05%聚山梨酯80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml中，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，制成不大于100cfu/ml的孢子悬液备用。? 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8