0016控制菌检查用培养基的适用性操作规程.doc

控制菌检查用培养基适用性操作规程 一、目的：建立控制菌检查用培养基的适用性的标准操作规程。 二、范围：本标准规定了控制菌检查用培养基的适用性要求；适用于本公司检品控制菌检查用培养基的适用性操作规程。 三、职责：检验员对本标准的实施负责 四、依据：《中国药典》2015年版四部（通则1106） 五、内容： 1： 托盘天平生物安全柜BSC-1000ⅡA2）、电热恒温培养箱HH．BII.500-S层流超净工作台S.SW-CJ）、电热恒温干燥箱GZX-DH.600-Ⅱ） 1.2 锥形瓶（250～300ml、500ml内装玻璃珠若干）、培养皿（9cm）、量筒（100ml，500m1）、试管（18mm×180mm）及塞、吸管（1m1分度0.0l，10m1分度0.1）、注射器（20ml或30m1）、涂布棒、注射针头、玻璃消毒缸（带盖）、不锈钢桶（带盖）。玻璃器皿用前应洗涤干净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管筒内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加棉塞或硅胶塞，若用振荡器制备混悬液时，尚需用玻璃纸包裹瓶塞，以免振荡时供试液污染瓶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于160℃干热灭菌2h或高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干备用。? ??用具??大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70％～75％乙醇溶液浸泡）。无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。? .4 接种环（白铱金或镍铬合金，环径4～5mm、长度6～10cm）、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌镊子、灭菌钢锥、灭菌称样纸、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗手盆、陶瓦盖（12cm）、实验记录纸等。 试液? .1 0.1％苯扎溴铵溶液或其他适宜消毒液（供洗手、擦拭操作台面用）。? .2 5％石碳酸溶液（配好后装入玻璃消毒缸内，供消毒带菌吸管用）亦可选用其他适宜消毒液。 .3?? 75％乙醇溶液。? .4 ?碘酊或碘伏溶 3 验证所需要的稀释剂的确认 稀释剂：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液胰酪大豆胨 4 验证所需文件的确认表 文件名称 文件编码 是否有效版本 文件保存处 《微生物实验室清洁消毒操作规程》 □是 □否 质量部 《培养基的管理制度》 □是 □否 质量部 《检定菌的保存、传代、使用、销毁规程》 □是 □否 质量部 《TMQ?R-3870台式压力蒸汽灭菌器操作规程》 □是 □否 质量部 《HH．BII.500-S电热恒温培养箱操作规程》 □是 □否 质量部 《MJ-160B型霉菌培养箱操作规程》 □是 □否 质量部 《BSC-1000IIA2半排风生物安全柜操作规程》 □是 □否 质量部 《MJ-160B型霉菌培养箱操作规程》 《托盘天平操作规程》 □是 □否 质量部 检查人/日期： 复核人/日期： 验证项目和验证方法： 验证用菌株：（第 代） 铜绿假单胞菌〔CMCC（B）10104〕、金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕、枯草芽孢杆菌〔CMCC（B）63501〕、白色念珠菌〔CMCC（F）98001〕、黑曲霉菌〔CMCC（F）98003〕 验证所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冻干粉菌株为0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证实验菌株的生物学特性。 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24小时，分别挑取菌落接种到PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml中做10倍递增稀释至10-6~10-7，一般金黄色葡萄球菌稀释至10-6，铜绿假单胞菌、大肠埃希菌稀释至10-7， 制成每1ml含菌数不大于100cfu的菌悬液（见附表1.） 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。 .3 阴性对照?? 为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验。阴性对照试验应无菌生长。如 阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。 .4 培养基适用性检查 控制菌检查用培养基适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。本公司原辅料及产品的控制菌检查用培养基的检测项目及所用菌种见下表1： 表1控制菌检查用培养基的促生长、抑制和指示能力检查 控制菌检查 培养基 特性 试验菌株 耐胆盐革 兰阴性菌 肠道菌增菌液体培养基 紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 促生长能力 抑制能力 促生长能力+指示特性 大肠埃希菌