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GDTB 结核分枝杆菌与实验室生物安全 广东省结核病防治研究所 钟球 钱明 结核病的定义 结核病的疫情 结核病病原学 结核病的流行 结核病实验室生物安全 结核病实验室安全防护 结核病实验室废物处理 结核病职业暴露 结核病是由结核分枝杆菌（偶尔可由牛型或非洲型分枝杆菌）引起的一种细菌性疾病。结核病可累及全身各个器官，但以肺结核最为常见。该病具有传染性强，散播面广，不分地域均可发生。结核病可由呼吸道、消化道、皮肤等途径感染，但其主要传播途径是以空气为传播因子的呼吸道传染，而排菌的肺结核病人传染性更大，是传播感染的主要传染源。 结核病的疫情 感染人数 约为20亿 新发活动性肺结核病人 890万(141/10万) 新发涂阳肺结核病人 390万 结核病发病率每年增加1% 估计患病人数为1550万例（患病率为246/10万）其中包括HIV+TB38万例 死于结核病为180万例，结核病死亡率为29/10万,其中包括HIV+TB死亡27万例 结核病病原学 结核分枝杆菌是引起人类结核病的主要病原体。1882年由德国医生Koch发现。在微生物分类中，结核分枝杆菌属于厚壁门、裂殖菌纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属。分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆菌是人类主要的致病菌。 结核分枝杆菌的形态 结核分枝杆菌菌体具有多形态特征，除正常典型形态外，受不良生长条件的影响。如物理因素、化学因素，特别是药物因素，而呈现异常变化，其各种形态可归纳为杆菌型（基本形态）、滤过型、颗粒型和球菌型（L型）4种类型。 1. 杆菌型（基本形态）结核分枝杆菌正常典型的形态是直或稍弯曲、两端钝圆的杆菌。菌体 长1～4μm，宽0.3～0.6μm，无芽胞、无荚膜、无鞭毛，生长发育期间有分枝生长倾向。 2. 滤过型 早在1901年，Foutes在检查细菌滤器滤过的结核分枝杆菌培养滤液时，在电子显微镜下观察到球状微粒体。1991年，Khomeko在豚鼠损坏性肺结核模型中证实了滤过型的存在。此球状微粒体可通过细菌滤膜，称为滤过型 。 3. 颗粒型 1907年莫赫(Much)在结核性冷性脓肿、浆液性渗出液、干酪性淋巴结等脓液中观察到革兰染色阳性颗粒，称为莫赫颗粒。莫赫颗粒的重要意义在于这些颗粒型体仍有生机与活力，在适宜的营养条件下，可重新获得增殖，发育生长出典型结核分枝杆菌。 4. 球菌型（L型） 结核分枝杆菌在体内外受物理、化学、免疫等因素的影响，维持菌体固有形态的细胞壁缺损或丧失，产生细胞壁缺陷型。细胞壁缺陷型细菌是1935年Kilienberger在英国Lister医学研究院研究念珠状链杆菌时首先发现的，故以Lister医学研究院的第一个字母，将细胞壁缺陷型细菌命名为L型菌。 结核分枝杆菌的染色特性 结核分枝杆菌本身无颜色，观察结核分枝杆菌必须染色后进行。结核分枝杆菌革兰染色阳性，但革兰染色不易着色。经苯胺染料着色后，能抵抗酸和酸乙醇脱色，此种特性称为抗酸性。Z-N染色法为最常用的一种抗酸染色方法，经此法染色后，分枝杆菌，包括结核分枝杆菌呈红色，而标本中其他细菌、细胞、杂质等均呈蓝色 结核分枝杆菌的生长特性 结核分枝杆菌生长缓慢，繁殖一代在人工培养基内约需要15～20小时，在静脉感染未经免疫小鼠肺中约需要15小时，在巨噬细胞内约需要15～20小时，在家兔角膜中约需要20～22小时。 结核分枝杆菌的抵抗力 结核分枝杆菌因细胞壁含大量类脂质，尤其是腊样物质，具有疏水性，对物理和化学因素的作用均较一般致病菌抵抗力强。 1. 物理因素影响 结核分枝杆菌生存能力较强，在温室和阴暗处干燥痰内可以存活6～8个月，粘附在飞扬的空气尘埃中可保持传染性8～10天。结核分枝杆菌一般较耐低温，在-6～8℃能存活4～5年。 干热对结核分枝杆菌杀伤力弱，痰内结核分枝杆菌在100℃下需要4～5小时被杀灭。湿热对结核分枝杆菌杀伤力强，在60℃30分钟、70℃10分钟、80℃5分钟和90℃1分钟可将其杀死，因此煮沸与高压蒸气消毒是最有效的方法之一。 结核分枝杆菌对光线和射线敏感，在太阳光直射下2～7小时死亡。病人用过的物品在强阳光下直晒半日，基本可达到消毒的目的。10～1mg/ml菌悬液，液层厚度3mm，用10W紫外线灯在距离确 0.5m处持续照射3分钟，在距离1m处持续照射 10分钟，经培养无细菌生长。但紫外线穿透力弱，难以透入固体物质内部和液体深层，因此紫外线通常用于空气和物体表面消毒。 2. 化学因素的影响 化学消毒剂的种类很多，其杀菌的机制因化学药物种类不同而异。乙醇使菌细胞蛋白质变性、凝固而产生杀菌作用。结核分枝杆菌直接接触70%～7