生物物质分离工程实验 - 生命科学学院- 湖北大学.doc

湖北大学 生物物质分离工程实验 （0704300793） 实 验 教 学 大 纲 （第2版） 生命科学学院 生物学实验教学中心 2010年8月 前 言 课程名称：生物物质分离工程实验 实验学时： 30学时 适用专业：生物工程；生物技术； 课程性质：专业基础必修 一、实验课程简介 植物生物学实验主要包括植物的形态解剖，系统分类及与环境的关系实验内容学习，以及相关的实验仪器设备使用操作；植物结构层次包含有细胞.组织.器官.个体.种群.群落.系统类群，植物分类阶元涉及界.门.纲.目.科.属.种。技能方面主要包括解剖观察，分类鉴定，相关仪器设备用具的操作使用实训。 二、课程目的 生物分离培养学生正确记录实验数据和现象、正确处理实验数据和分析实验结果的能力。。 实验二 鸡蛋黄中卵磷脂的分离纯化和鉴定 综合性 3 必做 实验三 双水相萃取相图 3 必做 实验四 影响双水相萃取系统相 3 必做 实验五 双水相萃取系统中蛋白质分配系数的测定-1 综合性 3 必做 实验六 双水相萃取系统中蛋白质分配系数的测定-2 综合性 3 必做 实验七 离子交换树脂的预处理及交换容量的测定 3 必做 实验八 有机溶液萃取法中pH对表观分配系数的影响 3 必做 实验九 离子交换法提取抗生素的工艺研究 必做 实验十 离子交换法提取抗生素的工艺研究 实验一 鸡蛋清中溶菌酶的提取及纯度鉴定（3课时） 实验类型： 综合性 实验目的：掌握从蛋清制备溶菌酶的原理和方法（等电点沉淀和盐析法）。 由于蛋白质在等电点时溶解度最低，所以蛋白质的沉降在等电点附近最为显著。若控制溶液的pH在等电点附近，并增加盐的离子强度，使蛋白质处于沉降前的“临界状态”，在适当的温度下，静置若干时间，蛋白质会以结晶的形式从溶液中析出。加入晶种，能控制晶体的形状、大小和均匀度，若结晶液浓度太低而结晶发生困难时，可适当加入些晶种，能使结晶顺利进行。 溶菌酶晶种 2、实验器材的准备：组织捣碎机（或电动搅拌机）、纱布、大烧杯、玻璃棒、冰箱、pH试纸、真空干燥器、多用循环水真空泵、布氏漏斗等 实验二 鸡蛋黄中卵磷脂的分离纯化和鉴定（3课时） 实验类型： 综合性 实验目的： 1、了解卵磷脂的性质。 学习提取卵磷脂粗品的方法。 机体的各种组织和细胞均含卵磷脂。在蛋黄（约10％）、神经、精液、脑髓、骨髓、肾上腺、心脏、蘑菇和酵母等组织内含量很高。卵磷脂分子中具有亲水基团和疏水基团，卵磷脂具有降低表面张力的作用；卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”，蛋黄卵磷脂可将胆固醇乳化为极细的颗粒，这种微细的乳化胆固醇颗粒可透过血管壁被组织利用，而不会使血浆中的胆固醇增加，可作为药物用于动脉粥样硬化等疾病的综合治疗。 1、实验药品的准备：（1）试剂： 新鲜蛋黄、95％乙醇、10％的NaOH溶液、丙酮、乙醚磁力搅拌机（或玻棒）、减压真空浓缩装置、恒温水浴锅、冰箱、多用循环水真空泵、布氏漏斗、玻璃漏斗、玻璃棒、小烧杯等实验三 双水相萃取相图 实验类型： 综合性 实验目的：掌握用浊点法制作双水相系统相图的方法，加深对相图的认识。 两水相形成的条件和定量关系可用相图来表示，相图是研究双相萃取的基础。相图是一条双节线，当成相组分的配比取在曲线下方时，系统为均匀的单相，混合后溶液澄清透明，称为均相区；在曲线的上方时，能自动分成两相，称为两相区；若配比取在曲线上，则混合后，溶液恰好从澄清变为混浊。（NH4）2 SO4溶液、PEG400、PEG00、蒸馏水、漩涡振荡器、微量滴管装置、电子天平、微量注射器、大试管、移液管等实验四 双水相萃取系统相的了解双水相系统形成的机理及常用的双水相系统掌握双水相系统中相比的测定方法巩固离心机的操作方法及注意事项。双水相系统通常是由水溶性的两种聚合物组成或一种水溶性聚合物与一种盐组成,与一般分离纯化技术相比,双水相技术具有处理容量大、能耗低、易连续化操作和工程放大等优点，在蛋白质、酶、核酸等生物大分子的分离纯化等方面受到广泛重视，是一种有发展潜力的易于工业化应用的生物分离技术。常用的双水相系统有：聚乙二醇（PEG）/葡聚糖（DEXTRAN）、PEG/磷酸盐、PEG/硫酸铵等。分成两相后，上下相体积比称为相比，相比增加，上相和下相相对组成的差别就增大，这将会极大地影响产物如酶在两相中的分配系数，使酶富集于上相。（NH4）2 SO4固体、PEG400液体、糖化酶滤液、电子天平（或台秤）、台式离心机等 实验五、六 双水相萃取系统中蛋白质分配系数的测定（6课时） 实验类型： 综合性 实验目的： 1、掌握蛋白质在