血清白蛋白测定.ppt

血液清蛋白测定与重复性实验 血液清蛋白测定与重复性实验 一、BCG法测定血液清蛋白试验 二、商品BCG试剂重复性能评价试验 一、BCG法测定血液清蛋白试验 1.血液清蛋白测定的临床意义 2.BCG法测定血液Alb的实验原理 3.实验材料 4.实验方法 5.实验结果 6.结果处理、分析（讨论） 1.血液清蛋白测定的临床意义 2.BCG法测定Alb实验原理 3.实验材料 试剂：商品试剂盒 器材：试管、加样枪、722分光光度计 4.实验方法 5.实验结果 5.1 自配BCG组检测结果 5.2 商品BCG组检测结果 6.结果处理、分析与讨论 6.1 以X±S表示所测得实验结果 6.2计算样本清蛋白含量。 血清白蛋白在pH4.2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂Brij-35存在时，可与带负电荷的染料溴甲酚绿（BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有强的吸收峰，其颜色的深浅与待测白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得血清白蛋白含量。 【注意事项】 1、实验证明：BCG不但与白蛋白呈色，而且与血清中多种蛋白结合呈色，其中以α球蛋白、转铁蛋白、触球蛋白更为显著，其反应速度较白蛋白稍慢，但实际上，血清与BCG混合即时“慢反应”已经发生，同时也有实验证明“慢反应”持续1小时才完成。故有人主张用定值参考血清作标准比较理想，并主张读取一分钟吸光度计算结果。 2、当60g/L白蛋白标准与BCG结合后，溶液光径为1cm，在630nm测定的吸光度应为0.811±0.035，如达不到此值，表示灵敏度较差。 【临床意义】 1、血清白蛋白参考值：35-55g/L； 2、血清白蛋白浓度降低：在临床上比较重要和常见，通常与总蛋白降低的原因（疾病）大致相同。急性降低主要见于大出血和严重的烧伤；慢性降低见于主要由于肝脏合成白蛋白功能障碍、腹水形成时白蛋白的丢失和肾病时尿液中的丢失等，严重时白蛋浓度可低于10g/L；白蛋白浓度低于20g/L时，由于胶性渗透压的下降，常见到水肿等现象。 【临床意义】 3、血清白蛋白浓度增高：常见于严重脱水所致的血浆浓缩； 4、A/G　某些病人可同时出现白蛋白减少和球蛋白升高的现象，严重者比值可＜1。这种情况称为A/G比值倒置。 5、文献报道还有极少见的因白蛋白合成障碍，血清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白缺乏症。 二、商品BCG试剂重复性能评价试验 1.重复性能评价试验的意义 2. 重复性试验的原理 3.实验材料 4.实验方法 5.实验结果 6. 结果处理、分析（讨论） 1.重复性能评价试验的意义 重复性试验的目的是评估实验方法出现偶然误差的概率 由于导致偶然误差的因素非常多，包括仪器稳定性、分析环境温度、试剂质量、标准品的稳定性、吸量准确性、混匀的充分性以及反应时间的把握度等，因此，做好重复性试验的前提是：排除上述干扰因素！ 2. 重复性试验的原理 在相同条件下（同方法、同试剂、同标准品、同仪器、同实验室、同操作者），对同一标本在一定时间内，进行m轮，每轮n次重复测定，从而获得试验方法的批内精密度数据 重复性试验根据一定时间间隔可分为：批内、天内、天间三种重复性试验 2. 重复性试验的原理 批内：根据临床标本特点（正常、异常），分别对低、中和高浓度在短时间内进行m轮，每轮n次重复测定，分别求取三种浓度的精密度数据 天内：对低、中和高浓度，分别在上午、中午、下午、晚上，进行m轮，每轮n次重复测定，分别求取三种浓度的精密度数据 天间：对低、中和高浓度，每天测定1次，连续监测20天以上，分别求取三种浓度的精密度数据 3.实验材料 试剂：商品试剂盒 器材：试管、加样枪、722分光光度计 4.实验方法 5.实验结果 【计算】 1、检验20次测定数据的离群值；如存在异常值时应剔除。对小样标本来讲，Grubbs检验方法概率意义明确，能给出严格的结果，是最合理的检验方法。 用Grubbs检验准则，检验离群值的统计学工式是： 式中Xd为离群值；X 为包括离群值在内的测定值的均数；S为包括离群值在内的测定值的标准差。 计算时将20个测定值进行按小到大排列，离群值Xd先取最小和最大值进行检验；如果离群继续往里取。 【计算】 如果计算的G值大于系数表5-5中相应显著水平的a和测定次数n时的临界值Ga.n，则将Xd作为异常值弃舍，可按下述三种情况来处理： (1) 只有一个离群值的情况：设有n个测定数(X1X2X3X4……Xn)，其中X1为离群值,即可利用上述公式，直接对X1进行检验。 (2) 如果离群值是两个或两个以上都分布在同一侧，X1、X2都是离群值，则首先检验最内侧的一个数据（X2），即通过检验G2来决定X2是否应该舍弃。如果X2应该舍弃，X1自然应该舍弃。如果X2不应舍弃，则再检验X1，