血细胞分析仪的介绍.ppt

血细胞分析仪的介绍 江苏省中医院 葛亮 血细胞分析仪50年的发展历史 1590 年荷兰人米德尔堡和詹森设计制造了最原始的显微镜（图1），1610 年伽利略使用望远镜观察小的物体并将其放大，后来被列文霍克改进成为原始的显微镜。1658 年意大利人马尔皮基应用最原始的显微镜首先观察到了红细胞，他是第一个见到红细胞的人，开始进行红细胞计数则是200 年后的事情了。而设计并生产出第一台血细胞计数仪则又过了近100 年。 库尔特原理 计数原理是根据血细胞的不良导电性和产生电阻抗原理来计数血液中的细胞，也就是电阻式血细胞计数原理，这种原理现在已经成为血细胞计数和分析中最为经典的原理。 血细胞分析仪的技术进步 1、稀释技术的进步 2、分析参数的增加 3、血小板计数功能的增加 4、自动取样技术 5、仪器的清洗技术 6、小孔管技术的改进 其他计数原理的血细胞分析仪 1. 激光法：应用单束激光照射到经过鞘流技术处理的排列成一列的单个细胞上，根据细胞阻断激光束的频率以及PMT 收集到的激光折射信号，对细胞的数量、体积进行分析的仪器。 其他计数原理的血细胞分析仪 2. 离心式血液分析仪：将血液充入到含义特殊试剂的毛细管内，在专用离心机上离心，根据血细胞中各种成份的比重不同而分布在不同的细胞层内的原理，血细胞被吖啶橙染色，各细胞层会有明显的颜色差异，然后将毛细管放在特殊的判读机上对不同的细胞层进行定量分析. 3. 移动光学法：早期的光学法血细胞计数仪器， 采用普通光源，血细胞在移动过程中被检测到，不能分析细胞的大小和内部结结构，因此仅可进行红细胞和白细胞的计数 从三分群到五分类 三分群： 小细胞 单个核细胞 粒细胞 五分类： 淋巴细胞 单核细胞 中性粒细胞 嗜酸细胞 嗜碱细胞 白细胞三分群法原理 各种单纯电阻法血细胞分析仪的白细胞三分群法原理是根据白细胞体积分布直方图进行分析和计算得到的。经过特殊溶血剂处理的白细胞，可将特定的细胞群进行处理，使得绝大多数淋巴细胞体积缩小，使得中性粒细胞体积适当增大。因此在白细胞分布直方图上出现两个明显的细胞分布峰。左侧体积较小的一群细胞称为淋巴细胞群（LYM），右侧体积较大的称为粒细胞群（GRAN），位于两者之间的称为中间细胞群（MID）， 中间细胞群一般指含有嗜酸粒细胞，嗜碱粒细胞和单核细胞的细胞群。 白细胞五分类法原理 进入90年代中期以来，国外许多厂家已经不满足于三分类型的血细胞分析仪，逐步开始研制和推出具有五分类或更多项白细胞分析技术的全自动型血液分析仪器，比较著名的厂家有：Coulter 、Sysmex 、ABBOTT 、Bayer 、ABX等。各厂家使用的白细胞分类技术多样化， 复杂化，使得白细胞分类技术更加成熟和可靠。而技术的提高也带来了仪器和消耗品（试剂）价格的增加。 五分类VCS技术 运用V、C、S三种探针,在流式通道的某一位点,对通过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检测，以及三维分析,以确定其亚群性质。 V-低频波，分析细胞体积； C-高频波，分析细胞核型； S-激光，分析细胞的颗粒特性。 接近原态的WBC分析 VCS检测 十余种异常细胞的报警提示 细胞化学技术：核酸荧光染色 区别于酸碱染色、酶染色、糖原染色 核酸染色物质（荧光物质） Polymethine （聚次甲基） Oxazine (口恶嗪） 不同的细胞亚群、不同的成熟阶段，其核酸的含量，核酸的结构，DNA/RNA的比例不同，表现不同的着色性。 与半导体激光有很好的适配性，633nm激发荧光 流式通道和光路系统 核酸染色和信号分析 采用阻抗、激光散射和荧光染色技术 直流电阻抗法（DC）用于测量细胞体积大小。激光散射产生的前向散射光、侧向散射光和侧向荧光可用于探测测白细胞体积大小、细胞内含物的情况( 细胞核以及颗粒情况)，侧向荧光则可以反应细胞内托样核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA ）的含量，特有的嗜酸性粒细胞检测溶血剂Strmatolyzer-EO 可将除了嗜酸细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜酸细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。在嗜碱细胞通道中，使用特殊溶血剂Strmatolyzer-BA 可将除了嗜碱细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜碱细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。 WBC分类散点图上的报警区域 网织红细胞散点图 IRF：未成熟网织红细胞比率 有效监控红细胞生成动力学 骨髓抑制 红细胞生成恢复期 血疗效的观察 ABX Pentra 系列五分类血细胞分析仪 ABX Pentra 系列全自动五分类血细胞分析仪，采用了白细胞计数通道，双鞘流检测通道(LMNE 散点图)和白细胞/嗜碱细胞（WBC/BAOS）通道同时进行检测来完成白细胞五