AU5800全自动生化研究仪检测降钙素原方法学评价.doc

AU5800全自动生化研究仪检测降钙素原方法学评价 　　摘要：目的 在AU5800全自动生化分析仪上用免疫透射比浊法检测降钙素原（PCT）进行方法学评价。 关键词：降钙素原；免疫比浊法；方法学评价；免疫荧光法 降钙素原（Procalcitonin PCT）在临床主要应用于感染性疾病的鉴别[1]，是诊断血行感染、菌血症、败血症的一个较好指标[2-3]。目前PCT的检测方法主要有放射免疫法、双抗体夹心法、胶体金法、免疫荧光法、免疫透射比浊法等。本研究选用国产免疫透射比浊法，具有快速、简便，且价格相对较低廉的特点。根据美国临床和实验室标准化协会9CLSI）和医学实验室认可标准（ISO15189）对实验室质量的要求[4]，实验室对检测系统（仪器、试剂、校准品等）必需进行性能验证[5]。因此，实验室需要对厂商声明的主要分析性能进行验证。本文对AU5800检测系统测定降钙素原（PCT）进行精密度、线性范围、参考区间等指标的方法学评价，再与酶免疫荧光法检测结果进行比对，观察结果相关性，以此来评价该检测方法在临床上的价值。 1 资料 1.1仪器 贝克曼AU5800全自动生化分析仪，梅里埃全自动荧光分析仪。 1.2试剂 1.2.1安徽大千生物工程有限公司生产的降钙素原测定试剂盒（免疫透射比浊法）（批号085813），标准品（批号084113）和质控品（批号084213）。 1.2.2梅里埃诊断产品（上海）有限公司进口的降钙素原测定试剂盒（酶免疫荧光法）（批号1002326640），校准品（批号1057790）和质控品（批号1057880）。 1.3 标本 患者标本为2013年10～11月实验室接收的67例临床送检标本。酶免疫荧光法随时检测送检标本，剩余血清-80℃保存用于免疫比浊法测试（一次性完成）。正常人群均为健康体检者，年龄16～77岁，选择血常规、CRP正常，即无急、慢性炎症的体检合格标本20例。 2 方法 2.1免疫透射比浊法 样品中的PCT与试剂中的PCT抗体发生抗原-抗体反应，形成复合物，从而引起透光度的减低，在一定范围内与样本中的PCT的量呈线性相关。 1.2酶免疫荧光法 结合一步免疫测定夹心法和最终荧光检测来进行测定。 2.3 精密度评价：按照CLSI EP15-A2，取2个浓度水平质控品，5d实验，每天做一批，每批每个水平3次重复测定，计算批内精密度和批间精密度的均值、标准差和变异系数。 2.4 线性评价 2.5参考区间评价 2.6相关性评价 通过67例不同病例分别用酶免疫荧光法和免疫透射比浊法测定，比较两者的相关性。 2.7统计学分析 实验数据采用SPSS 13.0软件和Microsoft Excel 2000软件进行统计分析。 3 实验结果 3.1 PCT精密度结果 精密度评价结果符合厂家声明的批内精密度CV≤8.0%、批间精密度CV≤15.0%。该检测系统的批内精密度和批间精密度均满足检测要求（见表1）。 3.2 线性结果 3.3参考区间的验证 3.4相关性实验 图2 免疫比浊法和免疫荧光法检测PCT结果比对 3 讨论 根据医学实验室认可标准（ISO15189）对实验室质量的要求，实验室对检测系统必需进行验证。对试剂验证包括：精密度、线性、准确度和参考范围等[6]。 精密度评价按照CLSI EP15-A2文件进行，实验数据显示在AU5800全自动生化分析仪上PCT测定的精密度达到了厂家的检测声明，批内和批间精密度分别小于8%和15%。线性评价即分析测量范围评价根据EP6-A文件，采用简便的平均斜率法。在AU5800全自动生化分析仪上PCT的浓度在0-58.8ng/mL范围内具有良好线性关系，由于PCT达到80ng/mL的血清标本难以获得，最高检测限58.8ng/mL偏低于厂家的最高测定值，有待于进一步验证。参考区间的验证参考NCCLSC28-A2文件，选择20份体检合格的健康人血清标本全部通过验证。与法国梅里埃诊断产品（上海）有限公司进口的降钙素原测定试剂盒（酶免疫荧光法）进行相关性实验，表明PCT免疫比浊法结果同样可靠（n=67，R2=0.9607）。 目前，检测PCT的方法很多[7]。传统的放射免疫法敏感性较高，但检测时间较长，且有放射性元素污染，使用受限；胶体金法为半定量法，不依赖仪器，操作简便快速，但敏感性低，只能作为临床筛查；免疫发光法[8]具有敏感度高、特异性强等特点，但是成本昂贵，不利于临床推广。免疫比浊法简便、快捷，适用于波长包括600nm的各种生化分析仪，可满足临床急诊及批量检测的需要；而且成本较低，可以大大减低患者的检测费用。 综上所述，免疫