DR5上调在5―烯丙基―7―二氟甲氧基白杨素增强TRAIL诱导人肺癌A549细胞凋亡中作用.doc

DR5上调在5―烯丙基―7―二氟甲氧基白杨素增强TRAIL诱导人肺癌A549细胞凋亡中作用 　　摘要 目的：观察5烯丙基7二氟甲氧基白杨素（AFMC） ）是否协同肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导人肺腺癌A549细胞凋亡.并探讨其机制是否涉及死亡受体5（DR5）的上调.方法：体外培养人肺腺癌A549细胞和人胚肺WI38细胞.碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）定量分析细胞凋亡率；DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带；Western Blotting 检测DR5蛋白表达.结果：单独用亚毒性浓度的AFMC（1.0 μmol/L） 或TRAIL（30 μg/L）处理A549细胞，细胞凋亡率不超过5%.AFMC（1.0 μmol/L）联合TRAIL（30 μg/L）的A549细胞凋亡率增高（37.80%， P0.05）.DNA琼脂糖凝胶电泳显示：两者合用A549细胞呈现典型的DNA梯形条带图谱，而WI38细胞未出现DNA梯形条带；Western Blotting分析发现：AFMC呈浓度和时间依赖性上调A549细胞DR5的表达，DR5特异性抑制剂DR5/Fc嵌合蛋白能有效降低两者合用诱导的A549 细胞凋亡率（P 　　1.6统计学分析 实验数据用SPSS 15.0软件包建立数据库（SPSS Inc， Chicago， IL），并进行统计学分析.数据表示为±s，经方差齐性检验后，用单向方差分析（One Way ANOVA）对多组均值进行比较，用LSD法对均值进行两两比较.P0.05，图1）.AFMC、TRAIL无论单用或合用于WI38细胞24 h，均未呈现凋亡特异性的DNA梯形条带（图3B）.AFMC对WI38细胞DR5表达无明显影响（图4B）.说明：亚毒性浓度的AFMC 对TRAIL诱导凋亡的增敏作用具有肺癌细胞选择性，与其选择性上调肺癌细胞DR5 表达有关. 3讨论 肺癌系全世界最常见的恶性肿瘤之一，全世界每年约有100～130万患者死于肺癌.我国卫生部2008年4月29日公布的第三次全国居民死亡原因调查显示，过去30年间我国肺癌死亡率上升了465%，肺癌已位居我国恶性肿瘤死亡率之首.其中约80%的肺癌患者为非小细胞肺癌（NSCLC），NSCLC发病隐匿，早期不易诊断，确诊时多为中、晚期，已丧失手术良机.目前治疗NSCLC的药物因其非选择性杀伤作用和较强的毒副反应，临床应用受限.临床仍采取以化疗为主的综合治疗，但5年生存率仍低于15%，并且极易复发、转移[11].寻求高效、低毒的新型抗肺癌药物是当前肿瘤防治研究的热点. TRAIL是1995年发现的与FasL和TNFα有较高同源性的TNF超家族成员.它们都能与靶细胞膜上特异性DR4和DR5受体结合，通过多种死亡信号转导途径诱导靶细胞凋亡.与TNF、FASL不同，TRAIL能选择性诱导肿瘤细胞、转化细胞、病毒感染细胞凋亡，而对肝细胞、骨髓细胞等正常细胞几乎无毒性.大量临床前实验证实TRAIL能有效地诱导多种肿瘤细胞系凋亡 [12].然而随着研究的深入，越来越多的肿瘤细胞尤其是一些恶性肿瘤对TRAIL存在先天性或获得性耐受[2].如何有效逆转肿瘤细胞对TRAIL的凋亡抵抗是当前亟待解决的问题.研究表明，细胞表面DR4和DR5的表达水平是决定肿瘤细胞对TRAIL敏感性的关键，而且在正常37 ℃的生理条件下， TRAIL与其受体结合，DR5的亲和力最强，从而在TRAIL诱导的凋亡通路中发挥最大作用[13].如何上调DR尤其是DR5的表达，增强肿瘤细胞的TRAIL敏感性，充分发挥TRAIL的选择性杀伤效应成为近年研究的热点. 作者前期研究通过细胞毒实验确定了AFMC和TRAIL的亚毒性（细胞毒性 　　参考文献： [1]GANTEN T M， HAAS T L， SYKORA J， et al. Enhanced caspase8 recruitment to and activation at the DISC is critical for sensitisation of human hepatocellular carcinoma cells to TRAILinduced apoptosis by chemotherapeutic drugs[J]. Cell Death Differ， 2004，11 （Suppl 1）：8696. [2]SINGH T R， SHANKAR S， CHEN X， et al. Synergistic interactions of chemotherapeutic drugs and tumor necrosis factorrelated apoptosisinducing lig