HPLC测定白头翁皂苷D油水分配系数和平衡溶解度.doc

HPLC测定白头翁皂苷D油水分配系数和平衡溶解度 　　[摘要] 目的：测定白头翁皂苷D的油水分配系数及其在不同溶剂中的平衡溶解度。方法：采用摇瓶法与高效液相色谱法相结合测定白头翁皂苷D的油水分配系数，采用高效液相色谱法测定白头翁皂苷D在6种有机溶剂及不同pH缓冲液中的平衡溶解度。结果：白头翁皂苷D在不同pH条件下油水分配系数大于零，随着pH升高白头翁皂苷D的平衡溶解度逐渐增加，在不同溶剂中白头翁皂苷D的平衡溶解度以甲醇最大（达到255.89 gL-1），乙腈中最小（0.20 gL-1）。结论：在胃肠生理条件下，白头翁皂苷D以分子状态形式存在，由lgPapp可知其吸收性较好，但水溶性较差，提示增加白头翁皂苷D的溶解度可能有利于提高其生物利用度。 [关键词]HPLC；白头翁皂苷D；油水分配系数；平衡溶解度 药物的亲脂性或疏水性影响着药物在细胞膜的渗透性，油水分配系数和平衡溶解度是反映药物脂溶性的2个不可或缺的重要理化参数，这2个重要理化参数对研究药物的体内过程和指导临床用药具有重要的意义[1-3]。白头翁皂苷D[4] （Pulsatilla saponin D，PSD）是从白头翁中分离出来的一种常春藤皂苷，对HL-60肿瘤细胞和LLC肿瘤细胞具有很强的抑制作用[5-6]，笔者前期研究亦发现其对人肝癌细胞SMMC-7721、人结直肠腺癌细胞HCT116等肿瘤细胞具有较强的活性，说明白头翁皂苷D具有成药性的可能。由于白头翁皂苷D的平衡溶解度和表观油水分配系数未见相关报道，同时，为了进一步开展白头翁皂苷D体内吸收过程及剂型研究，本文通过对白头翁皂苷D平衡溶解度和表观油水分配系数的测定以期为白头翁皂苷D剂型合理选择及药动学研究提供参考。 1材料 白头翁皂苷D对照品（中药固体制剂制造技术国家工程研究中心对照品室提供，经MS，NMR鉴定、HPLC测定，纯度在99%以上）；甲醇（上海振兴化工一厂，色谱纯）；磷酸二氢钠（汕头市西陇化工厂有限公司）；正辛醇（汕头市西陇化工厂有限公司，分析纯）；其他试剂均为分析纯。 高效液相色谱仪：Agilent 1260色谱泵，二级管阵列检测器（DAD），美国安捷伦科技公司；KQ-4000B型超声清洗机（巩义市予华仪器有限责任公司）；AL204电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；TDL-40B飞鸽牌台式离心机（上海安亭科学仪器厂制造）；HH-2数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）；SHZ-82气浴恒温振荡器（常州国华电器有限公司）；Millipore Synergy 超纯水系统（美国密理博公司）。 2方法与结果 2.1样品的制备 2.1.1 正辛醇水饱和液的制备 精密吸取200 mL正辛醇至500 mL具塞锥形瓶，加水200 mL，置磁力搅拌器上，搅拌24 h，静置，备用。 2.1.2 不同pH缓冲液的制备 按《中国药典》（2010年版二部）附录ⅩⅤD缓冲液的配制方法，分别配制pH为2.0，5.0，5.8，6.8，7.0，7.6的磷酸盐缓冲液[7]。另称取氯化钠2 g、量取浓盐酸7 mL至1 000 mL量瓶中，加水稀释至刻度配成pH 1.2的缓冲液。 2.1.3 对照品溶液的制备 精密称取白头翁皂苷D对照品（五氧化二磷减压干燥24 h）13.6 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成0.544 gL-1的对照品溶液。 2.2白头翁皂苷D的含量测定 2.2.1 检测波长的选择 取白头翁皂苷D对照品溶液，以甲醇为空白样品，采用紫外分光光度法在190～400 nm进行全波长扫描，白头翁皂苷D在203 nm处有最大吸收，因此选择203 nm作为白头翁皂苷D的检测波长。 2.2.2 色谱条件与系统适用性试验 Agilent 1260，大连依利特Hyperisil ODS2 C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相甲醇-水-甲酸 （75∶25∶0.1），流速1.0 mLmin-1，柱温30 ℃，紫外检测波长203 nm。理论塔板数按白头翁皂苷D计算不低于3 000，分离度大于1.5，色谱图见图1。 2.2.3 线性关系考察 取白头翁皂苷D对照品溶液液（0.523 gL-1），分别进样1，2，5，10，15，20 μL。按2.2.2项下色谱条件进行测定，分别记录白头翁皂苷D的峰面积。以进样浓度（Y）为横坐标，峰面积（X）为纵坐标作图并进行线性回归，得线性方程Y=3 320.1X-8.914 6，r=0.999 9（n=6），结果表明白头翁皂苷D进样质量浓度在0.052 3～1.046 0 gL-1呈良好线性关系。 2.2.4 精密度试验 精密吸取白头翁皂苷D对照品溶液，按上述色谱条件连续进样