TRAIL、c―FLIP在大肠癌和转移淋巴结中表达和意义.doc

TRAIL、c―FLIP在大肠癌和转移淋巴结中表达和意义 　　[摘要] 目的 检测TRAIL、c-FLIP在结直肠癌中的表达情况，探讨二者在大肠肿瘤的浸润转移及凋亡调控机制的可能相互关系和作用。 方法 选取新鲜结直肠癌、配对的癌旁正常组织各85例及转移淋巴结51例，运用MaxVision免疫组化和Western blot蛋白定量检测TRAIL、c-FLIP在各组间的表达，所得结果进行统计学分析。 结果 （1）TRAIL在结直肠癌组织中的定位及表达位于细胞膜及细胞浆，而c-FLIP主要位于细胞浆。（2）TRAIL在癌组、转移淋巴结（LNM）组与癌旁正常组的均广泛表达，三者比较差异无统计学意义（P0.05）；癌组中，未/低分化阳性表达与中高分化比较、无LNM组与LNM组比较差异无统计学意义（P0.05）；（3）c-FLIP在癌组阳性表达明显高于正常组（且无一例强染色）；转移淋巴结组阳性表达亦明显高于正常组，其强阳性表达88.2%（45/51），与癌组比较差异无统计学意义（P0.05）。其癌组中未发生淋巴转移阳性表达88.2%（30/34）、淋巴转移100%（51/51）、未/低分化和中高分化分别为96.8%（30/31）、94.4%（51/54），81例阳性表达中强阳性74%（60/81）；未/低分化腺癌与中高分化组表达比较差异无统计学意义（P0.05）。（4）Western blot蛋白定量检测发现，对于TRAIL，呈现出c-FLIP蛋白表达越高，其表达也反应性增高的趋势，TRAIL蛋白的表达与c-FLIP的表达呈相互拮抗性正相关。 结论 （1）c-FLIP在结直肠癌组织和转移淋巴结中存在过高表达，在正常组织低表达或不表达，而TRAIL在癌组织和转移淋巴结组织也存在相互拮抗性增高趋势。（2）高表达的c-FLIP可能与TRAIL死亡受体凋亡途径相互作用，对大肠癌的发生进展起到一定的作用。 [关键词] TRAIL；c-FLIP；凋亡；结直肠癌；淋巴结转移 [中图分类号] R735.3+4 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）12-10-04 结直肠癌是全世界临床上最常见恶性肿瘤之一，近年来发病率呈明显的上升趋势，其术后浸润转移及局部复发是结直肠癌患者死亡的主要原因，预后极差，5年生存率低[1-2]。结直肠癌的发生进展需要众多分子机制的参与，结直肠细胞的不稳定性、异常延长存活时间和最终恶变，与细胞凋亡机制密切相关。 TRAIL（TNF相关凋亡诱导配体），是TNF家族成员之一，可强烈选择性诱导和促进多种肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无明显促凋亡作用，是很有前景的抗肿瘤因子之一。c-Flip全称为细胞型Fas相关的死亡区域蛋白样白介素-1转换酶抑制蛋白，可强效抑制TRAIL-Rs和TNF-R1等死亡受体诱导的细胞凋亡，从而阻断细胞发生凋亡[3-4]。目前有关于TRAIL和c-FLIP在结直肠癌中相互作用的研究鲜有报道，本研究采用免疫组化方法和Western blot对两者在结直肠癌及转移淋巴结中的表达情况进行研究，以初步探讨两者在结直肠癌中相互关系及意义。 1 材料与方法 1.1 组织标本 收集汕大附一医院2010～2011年手术切除大肠腺癌标本85例，配对选取距癌5 cm外正常组织相同例数，所得标本均经病理学确诊。其中男49例，女36例，年龄21～92岁，所有患者术前未行任何治疗。85例大肠腺癌中，51例发生淋巴结转移，未/低分化腺癌31例，中高分化腺癌54例。所有标本分为两部分，一份立即置于-80℃冰箱保存，标本收集后进行Western blot检测；另一份制成常规病理标本。 1.2 方法 免疫组化：采用MaxVision-（TM）即用型快捷免疫组化一步法，兔抗人TRAIL多克隆IgG抗体、兔抗人c-FLIP多克隆IgG抗体和免疫组织化学染色试剂盒均购于上海博奥深生物技术有限公司；一抗TRAIL以1?100、c-FLIP以1?120稀释，均以已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照，DAB（聚合物法）显色。 Western blot：Western blot相关试剂、ECL显影液购于上海博奥深公司，内参β-actin及相应二抗购自美国Santa公司。一抗TRAIL以1?120、c-FLIP以1?150稀释，ECL显色拍片。 1.3 结果判断标准 免疫组化染色切片采用电子光学显微镜进行观察，随机选择5个视野，每个视野计数100个细胞，由两名专业病理医师读片，TRAIL主要表达定位于细胞质和细胞膜，c-Flip主要定位于细胞质。判断标准均使用FDA推荐的Hercept Test6评分方法：（-）为无细胞染色或0.05）；癌组中，未/低