仪器分析-第十四章 液相色谱法.ppt

第十四章液相色谱法 一、液相色谱仪器 二、高效液相色谱法的特点 三、流程及主要部件 一、液相色谱仪器 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 二、高效液相色谱法的特点 三、流程及主要部件 2.主要部件 (2)梯度淋洗装置 (3) 进样装置 (4) 高效分离柱 (5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器 c. 示差折光检测器（differential refractive index detector） 示差折光检测器 d. 荧光检测器（fluorescence detector） 第十四章液相色谱法 一、液相色谱固定相 二、液相色谱流动相 一、液相色谱固定相 （3）化学键合固定相 化学键合固定相的特点 2.液-固吸附分离固定相 3.离子交换色谱分离固定相 4. 空间排阻分离固定相 二、液相色谱流动相 2. 流动相类别 3. 流动相选择 4. 选择流动相时应注意的几个问题 第十四章液相色谱法 一、液-固吸附色谱 二、液-液分配色谱 三、离子交换色谱 四、离子色谱 五、离子对色谱 六、排阻色谱 七、亲和色谱(AC) 一、 液-固吸附色谱 二、 液-液分配色谱 三、 离子交换色谱 四、 离子色谱 五、 离子对色谱 六、 排阻色谱 七、 亲和色谱(AC) 第十四章液相色谱法 一、影响分离的因素 二、分离类型的选择 三、HPLC的应用 四、制备型液相色谱 一、影响分离的因素 2.流速 二、分离类型选择 三、 HPLC的应用 2. 稠环芳烃的分析 四、制备型液相色谱 2. 液相制备色谱的方法 3. 制备型液相色谱 第十四章液相色谱法 一、超临界流体色谱的特点与原理 二、超临界流体色谱仪的结构流程 三、超临界流体色谱的应用 一、超临界流体色谱的特点与原理 2. 超临界流体性质 3.原理 压力效应： 程序升压 HPLC与SFC比较 二、超临界流体色谱的结构与流程 2.主要部件 主要部件 三、超临界流体色谱的应用 2.甘油三酸酯的分析 固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾； 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH- 应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。 离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一中技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。 有关内容将在第十章第六节中讲授。 原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+ X -后；在两