中药秦艽与习用品中5种环烯醚萜类成分HPLC含量测定.doc

中药秦艽与习用品中5种环烯醚萜类成分HPLC含量测定 　　[摘要] 环烯醚萜类成分是中药秦艽的主要活性成分，其中马钱苷酸、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、 龙胆苦苷、獐牙菜苷在秦艽药材中的含量相对较高且具有良好的药理活性。实验中建立了中药秦艽中5种环烯醚萜的含量测定方法：Shiseido SPOLAR C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为0.04%甲酸水（A）-乙腈（B）梯度洗脱；体积流量0.8 mLmin-1；检测波长240 nm；柱温30 ℃；进样量5 μL。该方法分离度良好，标准曲线在线性范围内相关性良好，加样回收率均值在97.35%～106.2%。对8种39份秦艽药材进行含量测定，结果显示5种环烯醚萜类成分在8种秦艽类药材中均有分布。种内含量差异较大表明含量除了与物种有关外，与种质资源、环境和生长年限都密切相关。小秦艽中各组分的含量明显低于其他3种正品秦艽。 [关键词] 秦艽；HPLC；环烯醚萜 中药秦艽临床应用广泛，是治疗风湿关节痛、结核病潮热、黄疸等证的主药之一。2010年版《中国药典》收载了秦艽Gentiana macrophylla Pall.、麻花艽G. straminea Maxim.、粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.和小秦艽G. dahurica Fisch.的根入药。目前这4种秦艽野生资源均处于濒危状态[1]。同时龙胆科龙胆属秦艽组中多种植物的根在地方临床用药及民族药中被用做秦艽。秦艽药材中主要活性成分是环稀醚萜类化合物，其中龙胆苦苷和马钱苷酸在药材中含量较高[2-3]。2010年版《中国药典》将这2个化合物作为药材质量评价的指标性成分。现代药理学研究结果显示，除了龙胆苦苷和马钱苷酸，其他多种环烯醚萜成分均具有良好的药理活性。獐牙菜苦苷、獐牙菜苷以及6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷均对fMLP诱导产生的超氧化物的生成有抑制作用[4]。曹晓燕等建立了秦艽中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷和马钱苷酸的含量测定方法，结果显示不同来源的6种秦艽药材（秦艽、粗茎秦艽、达乌里秦艽、麻花艽、管花秦艽G. siphonantha、黄管秦艽G. officinalis）中4种成分含量没有显著性差异而同种的不同器官中这4种成分的含量有显著性差异[5-6]。张明燕等[7]建立了UPLC测定秦艽中龙胆苦苷和马钱苷酸含量的方法。文献报道中均没有测定6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷的含量，习用品仅涉及秦艽组2种植物。考虑到报道中的这些不足，本研究建立了同时测定马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷5种环烯醚萜类成分的含量测定方法，并对中国药典收录的秦艽及同属近缘种（粗壮秦艽G. robusta、长梗秦艽G. waltonii、全萼秦艽G. lhassica和西藏秦艽G. tibetica）8种39份样品的含量进行测定，为秦艽类药材的质量评价提供基础研究资料。 1 材料 Agilent高效液相色谱仪（Agilent 1260系列）、Sartorius BP211D型电子分析天平、KD-2500B型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、Milli-Q纯水仪（美国Millipore 公司）、甲醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）、乙腈（色谱纯，Fisher Scientific）、甲酸（色谱纯，Fisher Scientific）。龙胆苦苷gentiopicroside（纯度98%，批号200712），购自上海中药标准化中心；马钱苷酸loganic acid（纯度98%，批、獐牙菜苦苷swertiamarin（纯度98%，批、獐牙菜苷sweroside （ 纯度98%，批，均购自上海鼎睿化工有限公司；6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷6′-O-β-D-glucopyranosylgentiopicroside（纯度98%，批号201211），购自北京德威钠生物技术有限公司。实验用秦艽药材共39批见表1。所有样品原植物采集后均由上海中医药大学中药学院赵志礼教授鉴定。其凭证标本保存于上海中医药大学中药学院药用植物标本室。用于建立含量测定方法的秦艽药材（SP1）购自安徽亳州药材市场，作者经形态、显微及化学鉴定为粗茎秦艽。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 Shiseido SPOLAR C18色谱柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相为0.04%甲酸水（A）-乙腈（B），B为0～10 min（9%～11%），10～20 min（11%～12%），20～22 min（12%～12%）；体积流量0.8 mLmin-1；