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五味子多糖提取分离与药理作用探究进展 　　[摘要] 近年来五味子多糖的研究取得了很大进步，该文综述了五味子多糖的提取、纯化、分级、含量测定、结构解析的方法和技术，及其所具有的保肝、抗肿瘤、增强免疫、抗衰老、抗疲劳、抗变态反应等药理作用。五味子多糖具有较强的药理活性，但多糖的提取、纯化效率仍不高，功能活性测定大部分是在五味子粗多糖的基础上进行的，其作用机制尚需深入探讨。 [关键词] 五味子；多糖；提取；纯化；药理作用 五味子是木兰科植物五味子Schisandra chinensis （Turcz.） Baill.的干燥成熟果实，习称“北五味子”，是著名滋补性中药，始载于《神农本草经》，列为上品。中医理论认为，五味子性酸、甘、温，具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心之功效 [1]，化学成分主要有挥发油、木脂素、有机酸、多糖、氨基酸、无机元素等[2]。早期的研究多集中在脂溶性成分方面，但传统用药习惯以及许多五味子水提液的显著药理活性实验，均提示五味子的水溶性成分研究不可忽视。近年来，许多学者从五味子水提液中分离得到五味子多糖，并对其活性进行了深入研究。现将五味子多糖的研究近况进行概述，以期对五味子多糖的研究、开发和利用提供参考和借鉴。 1 提取工艺 根据多糖溶于水的性质，一般采用热水浸提，乙醇沉淀的方法。可以直接提取，也可先以石油醚、无水乙醇或其他有机溶剂脱脂后再进行提取。多糖受提取温度、时间、溶剂量、提取次数等因素影响呈现不同的提取效果，多项研究表明，温度是影响五味子多糖得率的最重要因素[3]，可依据具体情况确定最佳提取工艺。由于碱性物质能打断植物细胞壁中纤维素、半纤维素与木脂素之间连接的酯链，溶解与细胞壁多聚糖结合的酚醛酸、糖醛酸，而且酸性条件可能致使糖苷键断裂，因此，加碱能够大幅提高五味子多糖的提取率[4]。研究表明，采用稀碱法可显著提高对五味子多糖的提取率，是水提法的1.12倍，碱水法的1.06倍 [5]。在热水浸提的基础上采用超声波、微波进行辅助提取是对传统提取方法的一种改进，可有效提高提取率，缩短提取周期，减少溶剂用量[6]。另外，采收期和生长环境也是影响北五味子中多糖含量的重要因素 [7]。 酶技术是近几年广泛应用与活性成分提取的一项生物技术，常压条件下所用的酶有蛋白酶、纤维素酶、果胶酶等。在酶作用下，植物组织分解后，可加速多糖的释放和提取。比较酶法提取与传统水提法，发现酶法的平均提取率比水法提高16.79% [8]。近年来，越来越多的新技术方法应用与有效部位的提取分离，除上述方法外，还有学者应用超滤法[9]、半仿生法[10]提取五味子多糖。采用不同的提取工艺，对粗多糖的提取效果会产生影响，表1为各方法提取多糖的优缺点比较。 2 分离纯化 采用水提醇沉法得到的多糖粗制品中，一般含有无机盐、蛋白质、低相对分子质量的有机物等许多杂质，为进一步研究多糖提供较纯的物质原料，因此必须要对粗多糖进行纯化。纯化主要包括脱蛋白、脱色、透析和分级等步骤。 2.1 脱蛋白 常采用的方法有Sevag法、三氯乙酸-正丁醇法、酶法以及酶法与Sevag联用法等。三氯乙酸法操作较为简便，而Sevag法条件更温和，有时为达到更好的分离纯化效果，也将几种方法联合使用，目前最常用的是Sevag法。 2.2 脱色 五味子多糖脱色常用的方法有活性炭、过氧化氢、聚酰胺和大孔树脂等法。其中颗粒活性炭对多糖吸附较多，双氧水脱色易对多糖结构造成破坏，必须严格控制脱色条件，大孔树脂吸附法适合小分子物质，用于纯化多糖易使多糖活性降低[14]，聚酰胺脱色效果较为理想[13]。 2.3 除小分子杂质 去除多糖中所含的游离氨基酸、单糖等小分子水溶性成分最常用的是透析法。将多糖提取液置于透析袋中，逆向流水透析。该方法的关键之处在于选择规格适宜的透析膜，既能去除小分子，又尽可能地减少样品损伤。 目前，用连续透析仪是较为方便的方法。 2.4 纯化分级 经过除杂后的多糖仍是混合物，其化学组成、聚合度、分子形状等具有不均一性。要得到均一的多糖组分，需对该混合物进行分级。 沉淀分级法：多糖溶液属于多分散系物质，由于多糖类化合物均难溶于有机溶剂，初步纯化时可采用不同浓度的乙醇使多糖分级。杨婷婷等[15]将五味子粗多糖配成1%左右的溶液，逐步滴加无水乙醇，当乙醇达12%，20%，30%，36%时出现明显沉淀，离心去除液体，共获得4个多糖级分。韩学忠[16]采用恒温沉淀分级法将精制五味子多糖样品分成5级，药理实验证明有药效作用的多糖都集中在乙醇40%没有沉淀下来的部分。 柱色谱法：为从五味子粗多糖提取物中得到均一组分，尚需对其进行进一步纯化。主要方法有离子交换树脂和凝胶柱色谱等。离子交换柱色谱适合于分离各种酸性、中性黏多