小鼠经鼻腔给药醒脑静微乳与mPEG2000―PLA修饰醒脑静微乳后体内栀子苷动力学比较探究.doc

小鼠经鼻腔给药醒脑静微乳与mPEG2000―PLA修饰醒脑静微乳后体内栀子苷动力学比较探究 　　[摘要]该实验建立了小鼠体内醒脑静微乳和mPEG2000-PLA修饰醒脑静微乳鼻腔给药后测定血浆栀子苷浓度的高效液相色谱法，探讨2种制剂经鼻腔给药后栀子苷在小鼠体内的药动学过程。将80只小鼠分为2组，分别鼻腔给药醒脑静微乳和mPEG2000-PLA修饰醒脑静微乳后，于不同时间点摘眼球取血，HPLC测定血浆中栀子苷的量，以Kinetica软件非房室模型拟合药动学参数。结果显示小鼠鼻腔给药醒脑静微乳后，血药主要药动学参数为Cmax（4.36±2.69）mgL-1，tmax1 min，MRT（29.73±4.54）min，AUC（53.63±14.03） mgL-1?min；小鼠鼻腔给药共聚物修饰醒脑静微乳后，血药主要药动学参数为Cmax（9.75±4.14）mgL-1，tmax 1 min，MRT（22.34±2.90）min，AUC（131.87±40.13）mgL-1?min。与醒脑静微乳相比，共聚物修饰醒脑静微乳经小鼠鼻腔给药后，栀子苷入血程度更高，可能与其刺激性较小而吸收较多有关。 [关键词]醒脑静微乳； mPEG2000-PLA； 栀子苷； 鼻腔给药； 药动学 醒脑静主要由麝香、郁金、栀子、艾片组成，具开窍醒脑、凉血活血、清热解毒之功效，为临床救急必备用药之一。醒脑静处方中既有脂溶性成分也有水溶性成分，而微乳作为一种热力学稳定的油水混合体系，可同时溶解水溶性和脂溶性2部分成分，因此本实验室前期将醒脑静制备成微乳制剂[1]。考虑到微乳中药物及表面活性剂对鼻黏膜有一定的刺激性[2]，实验室前期以聚乙醇单甲醚2000-聚乳酸（mPEG2000-PLA）嵌段共聚物替代部分表面活性剂修饰醒脑静微乳制备了共聚物修饰醒脑静微乳，通过考察两者对鼻黏膜刺激性发现长期给药共聚物修饰微乳可表现出降低对鼻黏膜刺激性的作用[3]。为了进一步研究2种微乳的药动学差异，为醒脑静制剂合理用药提供药动学实验依据，本实验研究了2种醒脑静微乳中栀子苷在小鼠体内的药动学过程。 1 材料 LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Sartorius BS 110S型电子分析天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）；G16型医用高速离心机（白洋离心机厂）；MX-S涡旋仪（北京大龙兴创实验仪器有限公司，Dragon Lab）；IKA匀浆机（德国）。 栀子苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号110749-201115）；醒脑静微乳、mPEG2000-PLA修饰醒脑静微乳（实验室自制，栀子苷质量分数均为20.2 gL-1）；乙腈、甲醇（美国Fisher公司，色谱纯）；纯净水（杭州娃哈哈集团）；其余试剂均为分析纯。 ICR小鼠，雄性，18～20 g（北京维通利华实验动物技术有限公司），合格证编号SCXK（京）2012-0001）。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 DiamonsilTM钻石C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈-水（14∶86）；检测波长238 nm；流速1.0 mLmin-1；柱温室温。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品10.03 mg，置10 mL量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，得质量浓度为1.003 gL-1储备液。 2.3 样品采集与处理方法 摘眼球取血后肝素抗凝，离心分离血浆备用。吸取小鼠血浆100 μL，加入乙腈300 μL沉淀血浆蛋白，漩涡混合器振荡60 s，10 000 rmin-1高速离心10 min，吸取上清液360 μL，60 ℃水浴，空气吹干，加入甲醇100 μL振荡30 s，10 000 rmin-1高速离心10 min，取上清液20 μL进样。 2.4 方法学考察 2.4.1 专属性试验 样品按2.3项下方法处理，按2.1项下色谱条件测定。结果栀子苷的保留时间为14.2 min。小鼠空白血浆的内源性物质对栀子苷的测定均无干扰。结果见图1。 2.4.2 线性关系考察 取对照品储备液，用乙腈分别稀释成质量浓度为2.76，5.52，11.03，22.07，55.17，110.33，160.48，200.6 mgL-1的栀子苷溶液，各取10 μL加入空白1.5 mL离心管中，吹干，加入小鼠空白血浆100 μL，涡旋混合30 s，按2.3项下处理，进样分析。以栀子苷质量浓度C（mgL-1）为横坐标，以栀子苷峰面积A为纵坐标，进行线性回归，得到回归方程为A=15 217C+851.82，r=0.999 9，血浆中栀子苷质量浓度在0.28～20.06 mgL-1，峰面积与血浆药物浓度呈良好的线性关系。 2.