临床微生物SOP-粪便标本细菌学检验标准操作规程.doc

1.目的 规范粪便标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2．适用范围 粪便培养。 3．标本 3.1 标本类型 粪便、直肠拭子。 3.2 标本采集 3.2.1 自然排便采集 自然排便后，挑取其脓血、黏液部分2～3 g，液体粪便取絮状物2～3ml，盛于灭菌容器内，或置于保存液（运送培养基）、增菌培养基中送检。 3.2.2 直肠拭子 如不易获得粪便时，或排便困难病人及婴儿，可用直肠拭子采取，即以无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后，插入肛门内4～5cm（幼儿2～3cm）轻轻转动取出，插入卡-布(Cary- Blair）运送培养基内或无菌容器内送检。 3.2.3 粪便标本应立即送检，室温保存不能超过2小时，如不能及时送检可以放人磷酸盐甘油（PH7.0）或转运培养基，但不能超过24小时。培养艰难梭菌的标本保存于-20℃以下。培养沙门菌和志贺菌的标本应放置磷酸盐甘油溶液中保存。保存弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2 (100mg/L) 试剂。 3.3 标本拒收标准 3.3.1 粪便标本放置时间超过2小时。 3.3.2 送检的粪便标本混有尿液。 3.3.3 直肠拭子未置于运送培养基中。 4. 试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、麦康凯平板。SS平板、TCBS平板及相关生化试剂等。 4.2 VITEK 鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性细菌药敏卡（GNS）、 革兰阳性细菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性细菌药敏卡（GPS）。真菌鉴定卡(YBC） 药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。 4.3 接种针、接种坏、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱。 4.4 诊断血清。 5. 细菌鉴定和药敏质控 参见《质量管理程序》。 6. 检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 6.1 涂片检查 粪便标本因各种 正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法辨别是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查（观察动力和菌群比例）。 6.2培养 6.2.1 沙门一志贺菌培养 参见《沙门菌属检验标准操作规程》、《志贺菌属检验标准操作规程》。 6.2.2 致病性大肠埃希菌培养 参见《致病性大肠埃希菌检验标准操作规程》。 6.2.3 霍乱弧菌培养 参见《霍乱弧菌检验标准操作规程》。 6.2.4 副溶血弧菌培养 参见《副溶血弧菌检验标准操作规程》。 6.2.5 小肠结肠炎耶尔森菌培养 参见《耶尔森菌属检验标准操作规程》。 6.2.6 空肠弯曲菌培养 参见《弯曲菌属检验标准操作规程》。 6.2.7 金黄色葡萄球菌培养 参见《葡萄球菌属检验标准操作规程》。 6.2.8 艰难梭菌培养 取水样或黏液样粪便立即接种于环丝氨酸头孢西丁果糖琼脂(简称CCFA)平板上，并将粪便作102～l06稀释后定量接种。35℃厌氧环境下培养48小时后，选择粗糙型黄色茵落，移种于葡萄糖庖肉培养基作毒素测定；同时制涂片，悬滴检查动力、革兰染色及生化鉴定。 6.2.9 真菌培养 参见《真菌检验标准操作规程》。 6.2.10 气单胞菌和邻单胞菌的培养 参见《气单胞菌属检验标准操作规程》和《邻单胞菌检验操作规程》。 6.2.11 分枝杆菌培养 参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。 7. 操作流程 8．结果报告 查出肠道致病菌，报告其菌名和药敏结果。 9．注意事项 9.1 空肠弯曲菌是微需氧菌，初次分离时需5% - 10% C02和85%氮。 9.2 痢疾病人要采集大量脓血标本另行培养。 9.3 粪便标本有很多杂菌，但不能由此认为粪便标本的采集就无需注意杂菌污染，为防止污染必须注意标本的采集方法。 10．临床意义 正常情况下肠道中有多种细菌寄生，包括大量的厌氧菌、肠球菌、大肠埃希菌、肠杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌等。引起感染性腹泻的病原微生物有：①细菌性：产毒素型腹泻，包括霍乱弧菌、肠毒素型大肠埃希菌等；侵袭型腹泻，包括志贺菌、肠致病型大肠埃希菌和肠侵袭型大肠埃希等；食物中毒，包括沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌和肉毒梭菌等；伪膜性肠炎，包括艰难梭菌或金黄色葡萄球菌；慢性腹泻，可能由结核杆菌引起。②真菌性：念珠菌、 毛霉菌等。③病毒性：轮状病毒等。 11. 危急值报告 培养出霍乱弧菌、伤寒沙门菌、致病性大肠埃希菌0157等及时按传染病报告，同时送CDC复核。 参考文献 [1] 中国合格评定国家认可委员会．CNAS - GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南．2008 [2] 周庭银编著．临床微生物学诊断与图解．第二版．上海：上海科