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临床微生物实用手册 （内部资料） 试剂配制 1、革兰氏染液 ① 甲液：结晶紫：1.25g 95％酒精：50ml DH2O：450ml ② 乙液：Na2CO3：6.25g DH2O：500ml ③ 碱性碘液：I2：6.0g KI：12.0g NaOH（1mol/L）：270ml 待KI完全溶于DH2O，后，再加I2 ④ 丙酮酒精液： 95％酒精：70ml 丙酮： 30ml ⑤ 碱性复红水溶液： 碱性复红：8g 95%酒精：100L DH2O：900m 2、抗酸染液（萋－尼） 1．石炭酸复红染液： （1）储存液 ① 碱性复红液：碱性复红8g，加95%乙醇至100ml，充分振荡使复红溶解。 ② 5%石炭酸水溶液：40～50℃水浴加热石炭酸使之融解，取液态石炭酸5g 溶于90ml热蒸馏水中，待溶液冷却至室温时，补充蒸馏水至100ml。 （2）石炭酸复红工作液：经定性滤纸过滤的碱性复红储存液10ml 与5%石炭酸水溶液90ml充分振荡、混合均匀后，用定性滤纸过滤。 2．5%盐酸乙醇脱色液：35%浓盐酸5ml 与95%乙醇95ml 混合。 3．亚甲蓝复染液： （1）储存液：亚甲蓝0.3g 溶于95%乙醇50ml 中，完全溶解后加蒸馏水至终体积100ml。 （2）亚甲蓝复染液：以蒸馏水5 倍稀释0.3%亚甲蓝储存液，经充分振荡、混合均匀后，亚甲蓝的终浓度为0.06%，使用定性滤纸过滤，即得亚甲蓝染液。 3、甲基红试剂 ① 甲基红：0.2g ② 95％酒精：300ml ③ DH2O：200ml 配制： 将甲基红称入乳钵内，加1mol/L NaOH 10ml左右（提高甲基红溶解度），碾磨，加入酒精300ml DH2O 180ml，混匀后，再加入1 mol/L HCL 10ml左右，中和其中的NaOH，最后试剂弱带酸性 4、靛基质试剂 ① 对二甲氨基苯甲醛:5.0g ② 纯戊醇或正丁醇:75ml ③ 浓盐酸:25ml 配制： 浓盐酸要待对二甲氨基苯甲醛溶解于纯戊醇后，再一滴滴徐徐加入 5、伏－波（VP）试剂 甲液：a萘酚：6.0g 无水乙醇： 100ml 乙液：KOH：40g 肌酸：0..3g DH2O: 100ml 注：甲液应储存于棕色瓶中 5、100g/L去氧胆酸钠溶液 ① 去氧胆酸钠：5g ② 0.1 mol/L NaOH：5ml ③ 溶解后加DH2O 45ml 于冰箱可保存半月有效。 6、氧化酶，细胞色素氧化酶 ① 10g/L盐酸二甲基对苯二胺（或）四甲基对苯二胺）水溶液 ② 10g/L a－萘酚乙醇液 7、硝酸盐还原试剂 ① 甲液：对氨基苯磺酸：0.8g 5mol/L醋酸：100ml ② 乙液： a－萘胺：0.5g 5mol/L醋酸：100ml 8、6g/L酚红指示剂 酚红：3g 1mol/L NaOH：10ml 1mol/L HCL：10ml DH2O：480ml 配制：将酚红放入乳钵内加NaOH研磨，加DH2O 280ml，无水乙醇200ml混匀后，加入HCL混匀。配好后液体应为透明橙红色。 染色 1、革兰氏染色法 试剂：①结晶紫 ②碳酸钠溶液 ③碱性碘液 ④丙酮酸酒精 ⑤碱性复红水溶液 方法： 1. 将标本均匀涂布于洁净玻片上，自然干燥，火焰微热固定 2. 滴加结晶紫（革兰甲液）和碳酸钠液（革兰乙液）各2滴，初染30秒钟，水洗。 3. 用碱性碘液2滴固定30秒钟，水洗 4. 用丙酮酸酒精脱色至无兰色脱落为止（约5－10秒），水洗。 5. 用碱性复红水溶液复染5秒钟，水洗待干镜检。 结果： 革兰氏染色阴性细菌在视野下呈淡红色。革兰氏阳性细菌呈深紫色 注意事项： 1. 涂片应均匀，厚薄适宜，应自然干燥后再加微热固定。以热而不烫手为易，过热易使细菌变形。 2. 脱色要至无兰色脱落为止。 3. 复染时间不可过长，以免细菌均染成G—菌。 4. 枯草杆菌，链球菌有时染成紫红色，是因为细菌繁殖代谢中有紫色嗜变性，不一定全是染色原因，所以要根据其菌体形态加以确定。 2、抗酸杆菌染色 试剂：①石碳酸复红溶液 ②盐酸酒精溶液 ③碱性美兰溶液 方法： 1. 加满石碳酸复红溶液在已固定德标本玻片上，加温2－3分钟，使染液即有蒸汽上升又不致沸腾，不时添加染液，以免在受热情况下干凅。 2. 倾出染液，以DH2O冲洗后用盐酸酒精溶液脱色，直至玻片无红色为止。 3. DH2O冲洗，用碱性美兰复染1分钟。 4. DH2O冲洗，待干镜检。 结果： 抗酸杆菌被染成红色，背景为兰色。结核、麻风杆菌为抗酸阳性（奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性） 3、庞氏染色法 试剂：庞氏染液 方法： 涂片经自然干燥后经火焰固定，滴加庞氏染液2滴，静染3－5分钟后，水洗，待