EGFP—pBABE逆转录病毒载体的构建及鉴定.pdf

医学分子生物学杂志，2010，7 (4)：329-332 JMedMolBiol，2010，7 (4)：329-332 DOI：10．3870／j．issn．1672—8009．2010．04．009 EGFP—pBABE逆转录病毒载体的构建及鉴定 刘革力，袁成福，张路渝， 卜友泉，易发平，马永平，宋方洲 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心 重庆市，400016 【摘要】 目的 构建表达增强绿色荧光蛋白 (enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP)的EGFP—pBABE 逆转录病毒载体并对其表达进行鉴定。方法 从 pEGFP—N3质粒上切下 EGFP片段 ，连接到pBABE载体， 构建 EGFP—pBABE重组质粒；将该重组质粒转染到PT67细胞后 ，荧光显微镜下观察 EGFP的表达；收集逆 转录病毒感染宫颈癌SiHa细胞后荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果 成功构建EGFP—pBABE重组质 粒。该质粒转染PT67细胞 24h后，荧光显微镜下可观察到EGFP的表达；用该重组质粒包装的逆转录病毒 感染宫颈癌 SiHa细胞 36h后，在荧光显微镜下可观察到明显的EGFP表达。结论 成功构建表达 EGFP的 EGFP—pBABE逆转录病毒载体 ，为进一步利用该载体制备逆转录病毒并观测逆转录病毒感染细胞的效率奠 定了良好的实验基础。 【关键词】 增强绿色灾光蛋白；逆转录病毒载体 【中图分类号】 R739．4 Construction and Identification ofEGFP-pBABE RetroviralVector ExpressingEGFP LIU Geli，YUAN Chengfu，ZHANG Luyu，BU Youquan，YIFaping，MA Yongping， SONG Fangzhou Molecular Medicine Cancer Research Center， Chongqing Medical University， Chongqing， 400016，China 【Abstract】 objective ToconstructEGFP．pBABEretroviralvectorandidentifyitsexpression 0fEGFP．M ethods TherecombinantretroviralvectorEGFP—pBABEwasgeneratedbycuttingEG— FP from pEGFP．N3plasmidandligatingtopBABE vector．TheEGFP．pBABE recombinantplasmid wastransfectedintoPT67cellsandtheEGFP expressionwasobservedunderthefluorescencemi． croscopy．SiHacellswereinfectedbyretrovirus．andtheEGFP expressionwasobservedunderthe fluorescencemicroscopy．Results EGFP—pBABErecombinantplasmidwasconstructedSUCCESSfully， theEGFPexpressionwasobservedunderthefluorescencemicroscopy24hafterEGFP．．pBABE plas．． mid transfectionintoPr67cellsand36hafterretrovirusinfectionintoSiHacells．Conclusion EG． FP-pBABErecombinantplasmidwasconstructedsuccessfully，whichestablished afavorablefoun． dationforfurtherproducingretrovirusandobservingitsinfectionefficiency． 【Keywords】 enhancedgreenfluorescenceprotein；retroviralvector 在 目前的基因转移系统中，有非病毒介导的基 有完整功能，只有经包装细胞系为其提供结构蛋 白 因转移及病毒介导的基因转移系统。在病毒介导的 组分后才能包装成具有完整功能的病毒颗粒，因此 基因转移系统中，应用较多的是腺病毒