第六章章酸度的测定.ppt

作业 1.国标规定的水分测定方法有哪几种？各适合哪一类样品中水分检测？ 2．在测定食品总酸度时对于深色样品应如何处理？对于用活性炭脱色效果不佳的样品应用什么方法测定？ 【试剂及仪器】 （1）试剂 1）高纯水 由超纯水制备装置制备，并经过0.45 μm 滤膜于真空下超滤。 2）流动相 2.5%NH4H2PO4（pH2.50），称取分析纯磷酸二氢铵25.0g ，用超纯水溶解并定容至1000mL，用浓H3PO4 调节至pH 为2.50，然后用0.45μm 孔径的合成维树脂滤膜进行真空超滤，再经超声波脱气5 min后用作流动相。 3)有机酸标准混合液 分别准确取AR 的草酸5mg，酒石酸50mg，苹果酸150mg，乳酸200 mg，乙酸200 mg，柠檬酸120 mg 和琥珀酸180 mg（准确0.1mg），以2.5%NH4H2PO4溶液溶解并稀释为100mL，使各有机酸浓度分别为50、500、1500、2000、2000、1200、1800 mg/kg。 4）80%乙醇溶液 吸取分析纯无水乙醇80mL，用高纯水稀释至100mL。 （2）仪器 1）高效液相色谱议（Waters 公司） 包括510 型高压输液泵，U6K进样器，481型可变波长紫外检测器，以及M730 型数据处理装置或工作站； 2）超纯水制备装置 Mill-Q，Millipore 公司； 3)高速离心机SCR20BC 型，Hitachi 公司 4）酸度汁 Sartorius 普及型pH计pB-10 型酸度汁 5）恒温水浴锅 【操作步骤】 (1)样品处理 1）固体样品：称取5～10g 样品（视有机酸含量而定）于加有石英砂的研钵中研碎，用25mL80%乙醇转移到50 mL 锥形瓶中，于75℃水浴中加热浸提15min，在20000r/min下离心20min，沉淀用10mL，80%乙醇洗涤两次，离心分离后，合并上清液并定容50mL。取5mL 上清液于蒸发皿中，在75℃水浴上蒸干，残渣 加5mL 流动相溶解，离心，上清液经0.45μm 滤膜在真空下超滤后进样。 2）液体样品：吸取5mL 样液（视有机酸含量多少酌情增减）于蒸发皿中，在75℃水浴上蒸干，残渣加5mL80%乙醇溶解，离心，上清液水浴蒸干，残渣加5mL 流动相溶解，离心，上清液经0.45μm 滤膜于真空下超滤后进样。 （2）色谱分析条件： 色谱柱：Microbondpok C18 柱，8mm ID×100mm 固定相：μ-Bondapak C18 10μm 流动相：2.5% NH4 H2PO4 （pH2.50） 流速：2mL/min 检测器：紫外可变波长检测器 检测波长：200nm 录敏度：0.05AUFS 纸速：0.5cm/min 柱温：室温 （3）测定 1）标准曲线绘制：分别取有机酸标准混合溶液1、2、4、6、8、10uL 进样进行色谱分析，得出有机酸标准色谱图，以各有机酸的峰高或峰面积为纵坐标，以各有机酸含量（μg）为横坐标分别绘制各有机酸的标准曲线，或用最小二乘法原理建立各种有机酸的回归方程。 2）样品测定：取适量样品处理液进行色谱分析，得出样品色谱图。 【结果计算】 将同一色谱条件下得到的样品色谱图和有机酸标准溶液色谱图进行对照，根据色谱峰的保留时间定性。必要时可在样液中加入一定量的某种有机酸标准液以增加峰高方法来进行定性。根据峰面积或峰高进行定量，再根据样品稀释倍数即可求出样品中各有机酸的含量。 书P93图5-1是上述色谱条件下的桔子提取液色谱图。 【注意事项】 （1）在样品溶液测定中，每进三次样液，就应进一次标准溶液进行校正，并重新计算校正系数，以保证测定结果的准确度。 （2）在提取样品中有机酸时，应选择80%乙醇溶液作提取剂，即可使有机酸提取完全，还可避免样品中蛋白质溶出影响色谱柱的使用寿命。若选择水或1.5~3mol/LHCl作提取剂，则可能使有机酸提取不完全或使样液中碳水化合物降解成草酸而影响测定结果。 （3 ）在反相HPLC 分离中，被分离组分的极性越弱，与键合相表面烷基之间色散力越强，K1（电离常数）就越大；相反，极性越强，即分子所含羟基数和羰基数越多，与流动相溶剂分子形成的氢键就越强，K1就越小，故根据有机酸的pKa值与分子极性成负相关的关系。理论上其K1顺序为草酸﹤酒石酸﹤柠檬酸﹤苹果酸﹤乳酸﹤琥珀酸﹤乙酸，但只有柠檬酸和琥珀酸都含有两个可与键合相表面烷基产生色散力的亚甲基，且前者的两个亚甲基都被带有部分正电荷的碳原子隔开，故它的烷基色散力小于后者。故实际的K1是草酸﹤酒石酸﹤苹果酸﹤乳酸﹤乙酸﹤柠檬酸﹤琥珀酸。 （4）本法回收率试验结果表明，除易挥发的乙酸外，其它有机酸的回收率都较为理想，不同有机酸回收率不同，而且，对同一种有机酸，在不同的样品中，回收率略有区别。