GB/T 9695.27-1991肉与肉制品　维生素B1含量测定.pdf

GB/T 9695.27-91 中华人民共和国国家标准 肉与肉制品 维生素 B 含量测定 1 Meat and meat products-Method for determination of vitain B1 content GB/T 9695.27-91 1 主题内容与适用范围 本标准规定了肉与肉制品中维生素 B1 含量的测定方法。 本标准适用于肉与肉制品中维生素 B1 含量的测定。 2 引用标准 GB 9695.1 肉与肉制品 取样方法 3 原理 试样用酸水解使维生素 B1 （硫胺素）游离，维生素 B1 经酶解、纯化后在碱性高铁氰 化钾作用下定量氧化成具有蓝色荧光的硫色素。在激发波长 365nm，发射波长 435nm 处测 定其荧光强度，荧光强度与硫色素含量成正比，以此计算维生素 B1 的含量。 4 试剂 所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水。 4 ．1 乙酸钠（GB 694 ）：2 mol/L 溶液。 4 ．2 盐酸（GB 622 ）：0.1 mol/L 溶液。 4 ．3 溴甲酚绿pH 指示剂：变色范围：pH 值为 4.0 （绿）~5.8 （蓝）。0.1g 指示剂与 0.05mol/L 氢氧化钠溶液 2.8mL 在玛瑙乳钵中研磨溶解，以水稀至 200mL 。 4 ．4 溴酚蓝 pH 指示剂：变色范围：pH 值为 3.0 （黄）~ 4.6 （蓝）。0.1g 指示剂与 0.05mol/L 氢氧化钠溶液 3mL 在玛瑙乳钵中研磨溶解，以水稀至 250mL 。 4 ．5 高峰淀粉酶：10%溶液。 4 ．6 氯化钾（GB 646 ）：25%溶液。 4 ．7 酸性氯化钾溶液：每升氯化钾溶液中加入 8.5mL 浓盐酸。 4 ．8 氢氧化钠（GB 629 ）：15%溶液。 4 ．9 铁氰化钾（GB 644 ）：1%溶液。 4 ．10 氧化剂：1%铁氰化钾溶液 1mL ，用 15%氢氧化钠溶液稀释至 100L 。临用前配制。 4 ．11 异丁醇。 4 ．12 95%乙醇（GB 679 ）：20%溶液。 4 ．13 酸性乙醇：20%乙醇溶液用 0.1mol/L 盐酸溶液调节 pH 为 3.4~4.3 。 4 ．14 人造沸石：市售品要经活化处理 活化方法：将粒度 40~60 目的人造沸石置于烧杯中，加约 5 倍量的热水搅拌，静置后 倾出上清液弃去。重复此操作，直至上清液透明。接着加入 5 倍量的3% 乙酸溶液搅拌浸泡 10min，静置后倾去上清液，重复此操作 3 次。然后加入约 5 倍量热的酸性氯化钾溶液，在 沸水浴中加热 25min，弃去上清液，加 3% 乙酸溶液洗涤两次后，用水反复洗至无氯离子为 止 （用硝酸银溶液检查）。将处理好的人造沸石浸没于水中保存，也可于 80℃备用。维生素 B1 回收率要大于 85% 。 4 ．15 维生素 B1 标准溶液 国家技术监督局国家技术监督局 1991-03-261991-03-26 批准批准 1991-12-011991-12-01 实施实施 GB/T 9695.27-91 4 ．15．1 标准贮备液 100 μg/mL： 称取 50.0mg 维生素 B1 标准品于 500mL 棕色容量瓶中，用酸性乙醇稀释至刻度，置冰 箱保存。 4 ．15．2 标准工作液 10 μg/mL： 取标准贮备液 10.0mL，用酸性乙醇定容至 100mL 棕色容量瓶中。 5 仪器和设备 5 ．1 实验室常规设备； 5 ．2 绞肉机：孔径不超过 4mm ； 5 ．3 培养箱：可控制温度 45~50 ℃； 5 ．4 棕色具塞试管：25~40mL ； 5 ．5 荧光分光光度计； 5 ．6 人造沸石玻璃层析柱：构造如图 1。 层析柱可控制流速为 1mL/min。准备方法：将脱脂棉置于毛细管顶端防止沸石流出和 控制溶液流速。把悬浮于水中的人造沸石倾入层析柱中，其高度约