“基因工程的基本操作程序“——基因表达载体的构建.docVIP

学生自主学习任务单 课程名称 选修③专题1 1.2“基因工程的基本操作程序” ——“基因表达载体的构建” 教师 刘萍 学习指南 解题 提示 （1）不同的限制酶切割后可能产生相同的黏性末端。 （2）用不同的限制酶切割获得的平末端，在DNA连接酶的作用下均可以连接上。但用不同的限制酶切割获得的黏性末端，必须黏性末端能够碱基互补配对才能连接上。 课堂形 式预告 在自主测试的解析过程中，结合交流平台收集到的，同学们在自学过程中提出的困惑，以及拓展延伸问题，展开师生与生生互动，讨论解决问题。 学习任务 达成 目标 “基因表达载体的构建”在《普通高中生物课程标准》属于“简述”层次的知识性目标，在福建省高考的《考试说明》中属于理解层次，要求学生能在较复杂的情境中综合运用其进行分析、判断和推理。 本微课自主学习的具体任务是：简述构建基因表达载体的必要性和基本要求；简述启动子、终止子的化学本质和功能；理解标记基因在筛选含目的基因的重组质粒中的应用。 导学 问题 1. 基因表达载体构建的意义是什么？ 2. 基因表达载体是由哪几个部分组成的？ 它们的作用各是什么？ 3. 启动子的方向和目的基因的表达方向是一致的，如果方向相反，还会转录、翻译出我们所需的蛋白质吗？ 4. 怎样利用标记基因进行重组DNA的筛选？ 5、如果基因表达载体中只有1个标记基因，则在选择限制酶的时候，酶切位点能不能在标记基因内部，为什么？如果有2个标记基因，切割时应注意什么？（可结合自主测试第2题思考） 自主 测试 1、如图为表达载体的模式图，若结构X是表达载体所必需的，则X最可能是( ) ? ?A．荧光蛋白基因 B．启动子 C．限制酶 D．DNA连接酶 2、基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-。根据图示判断下列操作,正确的是（ ） A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割 B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割 C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 3、将PVY病毒外壳蛋白基因(PVYCP)导人马铃薯，并使之表达即可获得抗PVY病毒马PVY-CP可以从质粒A中获取质粒B是选用 BamH I Hind Ⅲ Bgl II Sma I G↓GATCC CCTAG↑G A↓AGCTT TTCGA↑A A↓GATCT TCTAG↑A CCC↓GGG GGG↑CCC 请结合图像，运用所学知识回答问题： (1)步骤①中Hind III酶处理后得到的是 末端，该末端的碱基序列是 。步骤②中Klenow酶的作用是将此末端补平成 ，因此，Klenow酶最可能是 酶。 （2）步骤③经BamHI酶处理后，得到的就是 基因片段，该片段左侧的黏性末端的碱基序列是 。该基因的表达方向是“→”还是“←”请在该片段中表示出来。 （3）认真观察质粒B上的该片段，含3种限制酶的识别序列，Bgl II和BamH I识别的序列虽然 ，但酶切后的 相同，只有Sma I酶切后产生的是 末端。 （4）为了让PVY-CP 基因与酶切后的质粒B能连接上，并能使PVY-CP正确表达（即启动子的方向必须和基因表达方向 ），则步骤4应该用 酶和 酶处理质粒B。 自学困惑 3