第一章植物组织培养的基本技术.ppt

第1章 植物组织培养的基本技术 第一节 实验室的设计 一、植物组织培养实验室设计 二、设备和仪器 三、玻璃器皿及用具 四、培养条件 实验室设计 在进行植物组织培养工作之前，首先应对工作目的和规模以及需要哪些最基本的设备和条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。 。 准备室 主要工作：完成完成各种器具的洗涤、干燥、各种药品 贮备、称量、溶解、配制、培养基分装、培养基的灭菌等。 主要设备：水池、工作台、高压灭菌锅、烘箱、药品柜、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器. 缓冲室 具体要求和工作：面积5m2为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯，以照射灭菌。 无菌室 主要工作：用于植物材料的消毒、接种、培 养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。 主要设备：紫外光源、超净工作台、显微镜、解剖镜、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。 具体要求： 接种室宜小不宜大，一般7～8平方米，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。 接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1～2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。 培养室 具体要求：周围墙壁要求有绝热防火的性能。培养室温度一般保持在20—27℃左右，安装空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。 室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70%～80%为好，可安装加湿器。控制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h。 主要设备：培养架、空调机、除湿机、摇床、培养箱、紫外光源等。 作用：用于称取大量元素、微量元素、维生素、激素等药品精确度0．0001g。 作用：测定培养基及酶制剂的ｐＨ值 作用：低温保存材料，存放药品、培养基母液、激素、酶制剂。 (二）小型用品 1．镊子类(forceps) 常应用医疗上的镊子。 根据操作需要有各种类型 2．剪刀类(scissors) 可采用医疗五官科用的中型剪刀。主要用于切断茎段、叶片等。也可以用弯形剪刀，由于其头部弯曲，可以深入到瓶口中进行剪切。 3. 解剖刀: 切割较小材料和分离茎尖分生组织时，可用解剖刀。刀片要经常调换，使之保持锋利状态，否则切割时会造成挤压，引起周围细胞组织大量死亡，影响培养效果。 4. 解剖针: 解剖针可深入到培养瓶中，转移细胞或愈伤组织。也可用于分离微茎尖的幼叶，可以自制。 5. 接种盘: 组培瓶（玻璃）---要求透光度好，能耐高压高温, 以试管、三角瓶、培 养皿等使用较多。 三角锥瓶--- 适用于各种培养（如固体培养、液体培养、大规模培养或一般培养）。 培养皿--- 适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培养和无菌发芽。 试管--- 适合于用少量培养基及试验各种不同配方时选用。 在组织培养中配制培养基，贮藏母液，材料的消毒等需要各种化学实验用的玻璃器。 包括各种型号的烧杯、量筒、移液管、试剂瓶、容量瓶、试管以及移液管架、玻璃棒、滴瓶等。 吸耳球、刷子、记号笔、定时钟、手套、封口膜、脱脂棉、拖鞋、口罩、白大褂、滤纸。 湿度的影响包括培养容器内湿度的保持和环境的湿度条件。 第二节 器具洗涤 一、 洗涤液 洗涤液的种类很多，配制方法也不一样，可根据要求选择经济有效的洗涤液。常用的洗涤剂主要有肥皂、洗衣粉、洗洁精和铬酸洗涤液等。洗衣粉、洗洁精和肥皂均是很好的去污剂，对于带油脂太多的玻璃器皿，可先用其他洗涤液除污垢再用洗衣粉水等洗涤。 二、各种器具的洗涤 新器皿；新购置的玻璃器皿一般都有游离的碱性物质，使用前要在1%的盐酸溶液中浸泡24h再清洗，再用自来水冲洗，最后用蒸馏水洗2～3次彻底清洁后，烘干备用。 用过器皿；用过后玻璃器皿如烧杯、试管和培养瓶等要先除去其残渣，清水冲洗后将器皿放入洗衣粉溶液中浸泡一段时间，然后涮去器皿内污物，如洗涤效果不好，可增加洗衣粉水浓度或适当加热，器皿内外都要刷到，再用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗一遍，干燥后备用。 第三节 培养基及其配制 主要内容 在建立培养系统时，首先找到一合适的培养基。在植物组织培养历史进程中，事实上也紧密地伴随着培养基的研制史。