贝克曼库尔特MOFLO PA.ppt

Moflo XDP What is flow cytometry? 内在特性 外在特性 荧光试剂 外在特性 基本原理 流路 流动室 鞘液SHEATH 样本流SAMPLE 单细胞悬液5*105~1*106个/ml 光路 光源 滤片 光电倍增管PMT HV 电路 放大电路HV及GAIN 增益 A/D转换 统计：计算机 流 路 单细胞悬液 大多数仪器是在50-300 μm 大小的孔径中,将细胞悬液注射进入鞘液中 这一过程,成为流体动力学聚焦 FLOW CELL 光 路 光源 与通过的细胞聚焦在同一点上 激光 空冷 488nm blue, 633nm red, 325nm UV, 561nm green, 空冷/水冷 Enterprise II 水冷 Innova300系列 Innova70系列 散射光信号—前向散射光(FS) FS----Forward (Angel Light) Scatter 在激光束正前方的检测器, 为前向散射光检测器 FS的强度与细胞或其他颗粒的大小, 形状及 optical homogeneity 有关 FS用于检测细胞或其他粒子的表面属性 如:大小 散射光信号 – 侧向散射光 SS-Side (Angel Light) Scatter 与激光束垂直方向的检测器为侧向检测器, 也称为90度散射光检测器 SS的强度与细胞或其他颗粒的大小, 形状及 optical homogeneity 有关 SS用于检测细胞内部结构 如:胞浆内颗粒多少, 核质比 光路-荧光信号 每种荧光染料均有特定的激发波长, 并激发后会有发射波长,流式细胞仪检测的即是它特定的发射波长. 利用各种不同波长的光学滤片来收集(检测)这些光学信号 荧光染料的特性 常用荧光染料的特性 常用荧光染料(488nm,633nm激发) Fluorescein Isothiocyanate (FITC) Phycoerythrin (PE) Allophycocyanin (APC) Peridinin-Chlorophyll Protein (PerCP) Tandem Dyes PE-Texas Red (ECD) PE-Cy5 (PC5) PE-Cy5.5 (PC5.5) (futures) PE-Cy7 (PC7) (futures) 4 Color Single Laser (488nm)FITC/PE/ECD/PC5 Future Possibilities: 5 Color Single Laser (488nm)FITC/PE/ECD/PC5/PC7 光路 - 滤片特性 长通滤片 – 允许长于设定波长的光通过 短通滤片 – 允许短于设定波长的光通过 带通滤片 – 允许一定带宽的波长通过 光路 - 滤片特性 当以 45o 角放置滤片时,该滤片可以通过一定波长的光,同时也可以阻断并折射该波长以下的光 这种方式的滤片称为二向色性滤片( dichroic filter) 滤片 带通滤片 BAND PASS (BP) 只允许某些波长的光通过 二向色性滤片 DICHROIC FILTER 一定波长以上通过，该波长以下折射 Unique 4-Color Single Laser Design Optics - Detectors Photomultiplier tube (PMT) 将光学信号转变为电脉冲(数字数据)信号 Single Parameter Histogram Dual Parameter Histograms Dual Parameter Histograms 3-D Histograms 3-D Histograms 3-D Histograms 流动室 完全程序化控制的上样系统，配备多种试管规格的适配器 MoFlo? XDP: 适合所有应用的细胞接收系统 MoFlo XDP能收集的信号 散射光信号 FS 细胞大小 SS 细胞颗粒性 MoFlo? XDP: 分选高度稳定的保证-IntelliSORT 自动识别分选时环境条件（温度、湿度）并判断合适的分选条件 自动调节和优化液滴成像 根据环境条件和仪器系统情况自动调节分選参数来维持分选 可控温度范围： ± 2°C 可控鞘液压力变化： ± 2psi 如果条件变化太大自动停止分选，调节恢复自动恢复分选 独家的混合分选模式：四路分选分别选择不同的模式既有高纯度细胞，又不浪费任何一个细胞 MoFlo? XDP: aXcess Control Panel触摸屏系统，直观，简单 630