本科生《P》2第二章工具酶3-1.ppt

二、限制性内切酶图谱（Restriction mapping） A fragment of mouse DNA with EcoRI sticky ends carries the gene M. This DNA ,which is 8kb long, is inserted into the bacterial plasmid pBR322 at the EcoRI site.the recombinant plasmid is cleaved with two different restriction enzyme. The size fragments that were obtained on an agrose gel are isted below. Draw the restriction map for this sequence. (10 pts) EcoRI BamHI EcoRI + BamHI 8.0kb 5.5kb 4.0kb 6.0kb 4.5kb 3.5kb 4.0kb 3.0kb 2.5kb 1.0kb 第三节 DNA 修饰酶（DNA modifying enzymes）  * 《Princple and Technology of Genetic Engineering》《基因工程原理》 Professor, Dr. Degang Zhao (赵德刚) Guizhou Key Laboratory of Agricultural Bioengineering, College of Life Sciences, Guizhou University E-mail: dgzhao@gzu.edu.cn * 第五章 目的基因制备与克隆策略 Prepare the taget gene and cloning strategies 教学目的与要求： 1）掌握目的基因制备的主要方法。 2）掌握克隆目的基因的克隆技术。 * ★磷酸酶：水解核酸分子中磷酸二酯键（phosphodiester)的酶类称为磷酸酶（nucleases）。 ★外切酶：从核酸分子末端水解核酸分子的核酸酶是外切酶（exonuclease）， ★内切酶：在核酸分子内部进行水解的核酸酶是核酸内切酶（Endonuclease）。 ★限制性内切酶：（Restriction enzymes）即指识别双链DNA分子中特异位点并水解磷酸二酯键的核酸内切酶。核酸内切酶就像一把剪刀，可以对DNA分子进行剪切或切割。 Restriction enzymes are used cut DNA at defined sites of dsDNA for the manipulation of DNA. 第一节 限制性内切酶 一、限制性内切酶的种类 目前发现有三种类型： I型：结合于识别位点，并随机切割位点不远处的DNA。一不实用 II型：在特定的识别位点将DNA切割，又称“分子剪刀”。一实用 III型： 一不实用 These enzymes are found in bacterial cells, three types (I, II or III), type II enzymes are used in gene engineering. They cut at an internal position in a DNA strand as the endonucleases. In essence they may be thought of as molecular scissors. 限制酶分类： 根据酶的性质，可分为三类 二、类型II 核酸内切酶命名和特征 1、命名 是将分离该酶的细菌名第一个字母（大写）、属名的最先两个字母（小写）加上菌件名及分离酶的序号（大写）。如EcoRI（E：属名generic name；co：种名specific name；R I：菌件及顺序、序号）, an enzyme from a strain of