毕业论文《不同水中细菌总数及大肠菌群的测定》》.doc

不同水中细菌总数及大肠菌群的测定 胡俊 （化学与生命科学院2007级生物科学班）指导老师：王海潮 摘要：本实验采用平板菌落计数法、多管发酵法和滤膜法等方法测定东区自来水、珍珠湖和柳溪水中细菌总数和总大肠杆菌群，按照我国饮用水卫生标准（GB5749-85）规定每毫升水样细菌总数37℃培养24h不得大于100个，每升水中总大肠菌群37℃培养48h小于3个，来判断这三种水是否符合饮用水标准。结果表明：自来水的细菌总数为30CFU/mL，总大肠菌群数1CFU/L；珍珠湖水的细菌总数为1.0×104CFU/mL，总大肠菌群为2.4×103CFU/L；柳溪湖水的细菌总数为3.0×105CFU/mL，总大肠菌群为2.8×103CFU/L。自来水符合饮用标准，而珍珠湖和柳溪湖水不适合饮用。 关键词：细菌总数； 总大肠菌群； 平板菌落计数法； 多管发酵法； 滤膜法引言 水对我们的生命起着重要的作用，它是生命的源泉，是人类赖以生存和发展的不可缺少的最重要的物质资源之一。人的生命一刻也离不开水，水是人生命需要最主要的物质。水也是细菌存在的天然环境，水中的细菌来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。水中细菌种类及数量因水源不同而异。一般地面水比地下水含菌数量多，并易被病原菌污染。许多可致病的细菌种类也常常存在于水中，人们饮用后引发疾病，例如：痢疾、伤寒、霍乱等流行于世界各地，猖狂为虐，大多是饮用水污染了这些病原菌之故[1]。 水质细菌学检验是培水和污水水质分析工作中的一项重要指标。作为水质日常检测的七项指标(色度、浊度、细菌总数、大肠菌群、余氯、铁、锰)之一的细菌总数和大肠杆菌指数，能非常直观地反映水被细菌污染的程度。作为水质卫生学检测的两个常用的微生物基础指标，细菌总数和大肠杆菌指数在环境水质监测中起着非常重要的指标意义[2]。 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。水的大肠菌群数是指100mL水样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示[3]。 良好的饮用水细菌总数应小于100CFU/mL,而大于500CFU/mL则不宜饮用，我国饮用水卫生标准规定每毫升水样细菌总数37℃培养24h不得大于100个；每升水中总大肠菌群37℃培养48h小于3个；每升饮用水的水源中，总大肠菌群不得超过1000个[4]。 长期以来，微生物学工作者在探索新的细菌学检测方法方面做了大量的研究工作，一些先进方法应运而生，如快速荧光法和检测片法。快速荧光法[5]的原理是通过试剂促进活菌释放出较多的ATP活性物质，当活性物质与荧光酶反应时会发出荧光。对荧光计数就能得到细菌总数，该方法只需要短暂培养。检测片[6]是一种已经固化好培养基的纸制培养片。以3M公司的PetrifilmtmTM (Aerobic CountPlate)检测片为例，在检测时先用移液管在培养纸面上滴加lmL水样，马上盖上保护膜。再用有凹面的压板压出圆型(压出的凹人体积正好为lmL)，lmin后水样即溶解，培养基并固定，最后倒置培养。本次实验采用传统的平皿计数法检测水质中的细菌总数，不需要复杂的仪器和试剂，操作简单，方便。 ? 水中大肠菌群的传统检验方法包括：试管发酵技术和滤膜过滤技术。现在新兴发展的方法包括：酶活性检测法、纸片法、免疫学方法、分子生物学方法和试剂盒法等。由于样品中大肠菌群的数量通常很少，因此发展特异、敏感的检测方法至关重要，新的检测体系可能会满足这一要求，但技术上的复杂性以及检测成本的昂贵制约了这些新技术的广泛应用[7]。 ?本次实验采用常用多管发酵法和滤膜法来检测水中大肠菌群。多管发酵法的优势在于运用广泛，适用于各种水样的检验，不受浊度的影响，可以检验浊度比较大的水样，结果比较稳定，价格便宜，不需昂贵设备。滤膜法的优势在于操作简单、快速，非常便于检测大批量的低浊度水样，特别适用于自来水厂作为常规监测之用[8]。 1 实验部分 1.1 实验材料 1.1.1 材料来源 水样取自微生物学实验室，珍珠湖和柳溪。 1.1.2 主要的实验仪器与工具 SHP-250型生化培养箱（上海三发科学仪器有限公司），DHG-9053A型恒温干燥箱（上海一恒科技有限公司），SW-CJ-IFD型超净工作台（苏净集团安泰公司），GI54DWS型高压灭菌箱（致微（厦门）仪器有限公司），XS-212-201型显微镜（江南江光科学仪器有限公司），YP202N型电子天平（上海精密科技仪器有限公司），海尔冰箱（青岛海尔有限公司）