74霉菌的形态观察4.ppt

* 实验三 霉菌的形态观察 一、实验目的 (1)了解根霉、青霉、毛霉及曲霉的形态构造 (2)学会霉菌的载玻片培养法。 (3)进一步熟练显微镜的使用技术。 二、实验材料 1.菌种 黑曲霉、产黄青霉、腐乳毛霉、黑根霉。 2.培养基 察氏培养基 3.其他 显微镜、培养箱、培养皿、水浴锅、乳酸石炭酸棉蓝染色液、载玻片、盖玻片、无菌水、接种环、接种钩、解剖针、酒精灯、火柴、滤纸、玻璃铅笔等。 三、实验原理 霉菌为真核微生物，菌丝较粗大，有分枝或不分枝的。菌丝体为五色透明或暗褐色至黑色，或呈现鲜艳的颜色。在显微镜下观察时，菌丝皆呈管状。在固体培养基上生长，为绒毛状或棉絮状。一些较高等的霉菌丝状管道中皆有横隔，由横格状菌丝隔成许多细胞。细胞易收缩变形，而且孢子很容易分散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。该染色液使细胞不变形，具有防腐杀菌作用，且不易干燥．，能保持较长时间，溶液本身呈蓝色，有一定的染色效果。 此外，为了得到清晰、完整并保持自然状态的霉菌形态，还可以利用载玻片培养法或玻璃纸透析培养法进行观察。载玻片培养法是在一定湿度的培养皿中，放人一霉菌载片培养物，并盖上一块盖玻片，使霉菌在一狭窄的空隙中生长、繁殖便于在显微镜下观察霉菌的特殊形态构造，如曲霉的足细胞、分生孢子、顶囊等生长情况。并且还可在同一标本上观察到它们不同阶段的生长、发育状况。玻璃纸透析培养法，是利用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻璃之间取一小片，贴放在载玻片上，置于显微镜下观察。本实验以制片观察和载玻片培养观察为主。 四、操作方法 (一)制片观察法 (1)于一洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝溶液，用解剖针或接种钩从菌落边缘处取少量带有孢子的菌丝于染色液中，再细心地把菌丝挑散开，然后用盖玻片盖上，注意不要产生气泡。 (2)置于显微镜下，观察霉菌的形态。 (二)载玻片培养观察法 1.无菌培养皿的准备 在一洁净干燥的培养皿内，放一铝丝制载玻片架，再放人分别用纸包好的洁净载玻片1-2片及盖玻片1-2片，然后盖上皿盖，包扎后灭菌备用。 2.霉菌载玻片培养物的制备 （1）取约3ml经灭菌后的察氏培养基试管，标上青(毛、根或曲)霉字样。 （2）以无菌操作方式取出无菌培养皿中的载玻片和盖玻片，打开备用。 （3）取一标好字样的试管培养基，于酒精灯上以微火融化。 (4)待融化后的培养基冷却至45t左右时，接人标明菌名的相应霉菌孢子一环，搅拌均匀，立即取大约3-4环于载玻片中央，然后迅速盖上无菌盖玻片，并于载玻片右上角标明菌名。 (5)往培养皿中倒人约3ml的无菌水。 (6)将上述制备好的载玻片置于培养皿中的玻片架上，盖上皿盖，置于28℃培养箱中培养48-72h，取出，置于显微镜下观察霉菌的形态。