HPLC测定药用芦荟中芦荟苷与芦荟大黄素含量.doc

HPLC测定药用芦荟中芦荟苷与芦荟大黄素含量 　　摘要：目的 以离子液体1-丁基-3-甲基咪唑溴化盐（[BMIM]Br）为萃取剂超声辅助萃取，高效液相色谱法同时分离测定芦荟中的芦荟苷和芦荟大黄素。方法 采用Phenomenex C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流动相：甲醇-0.3%冰醋酸水溶液（65∶35）；流速：0.80 mL/min；紫外检测波长：360 nm；柱温：35 ℃。结果 芦荟苷和芦荟大黄素分别在0.000 336～1.68 ?g（r=0.999 96）、0.000 608～3.04 ?g（r=0.999 76）范围内线性关系良好，检出限分别为0.050 6、0.262 ng/mL，平均加样回收率分别为95.99%、95.80%。结论 本法操作简单快速、定量准确、灵敏度高、成本低，且对环境友好，是检测及分离芦荟中蒽醌类化合物的有效方法。 关键词：离子液体；超声辅助；高效液相色谱法；芦荟；芦荟苷；芦荟大黄素 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.12.022 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）12-0059-03 芦荟系百合科芦荟属多年生肉质草本植物，具有清肝热、通便的作用，用于便秘、小儿疳积、惊风，外治湿癣。现代研究发现，芦荟除具有抗炎、抗辐射等功效外，还具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、调节血糖等多种药理作用。芦荟的主要药用成分是以芦荟苷、芦荟大黄素为主的蒽醌类衍物，因此，对这2种有效成分的测定具有极其重要的意义。目前虽已有芦荟中芦荟苷和芦荟大黄素相关的测定研究报道，但其前处理多采用以甲醇和乙醇为主的有机溶剂回流提取法[1-5]，不仅消耗时间长，且易污染环境。本试验以离子液体1-丁基-3-甲基咪唑溴化盐（[BMIM]Br）溶液为萃取剂，利用超声辅助萃取，为芦荟资源的综合开发利用提供质控依据。 1 仪器与试药 LC-20AT液相色谱输液泵，SPD-20A紫外检测器，CTO- 10AS柱温箱，LC-Solution色谱数据处理系统（日本岛津公司）；KH-3200B型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）； TGL-16 g高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；SZ-2自动双重纯化水蒸馏器（上海泸西分析仪器）；FA2004A型分析天平。 芦荟苷、芦荟大黄素、对照品（纯度均≥98.5%，上海晶纯实业有限公司），1-丁基-3-甲基咪唑溴化盐（纯度≥99%，中科院兰州化学物理研究所），甲醇（分析纯，重庆川东化工有限公司化学试剂厂），乙醇（分析纯，重庆川东化工有限公司化学试剂厂），冰醋酸（分析纯，重庆川东化工有限公司化学试剂厂），二次蒸馏水（实验室自制）。芦荟原材料（产地广东，批购于当地药房，经西南大学黄承志教授鉴定为百合科植物芦荟叶的汁液干燥浓缩物。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex C18（250 mm ×4.6 mm，5 ?m）。流动相：甲醇-0.3%醋酸（65∶35）；流速：0.8 mL/min；进样量：20 ?L；检测波长：360 nm；柱温：35 ℃。色谱图见图1。 2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品芦荟苷、芦荟大黄素适量，甲醇溶解，配制成芦荟苷420 ?g/mL、芦荟大黄素760 ?g/mL的溶液，作 为储备液，避光保存，待用。分别准确吸取2种对照品储备液适量，用流动相配制成一系列不同浓度的混合对照品溶液，置于冰箱（4 ℃）内避光保存备用。 2.3 供试品溶液的制备 将芦荟原材料于70 ℃干燥至恒重后粉碎，过60目筛（0.5～1.2 mm），干燥条件下保存备用。准确称取0.1 g芦荟粉末，加入5 mL 1.2 mol/L离子液体溶液，浸泡4 h，超声（150 W， 40 kHz）萃取30 min，过滤取滤液，3500 r/min离心10 min，取上清液，经0.45 ?m有机滤膜过滤，进样分析。 2.4 线性关系考察 分别精密量取“2.2”项下混合对照品溶液，用甲醇稀释至不同浓度。其中芦荟苷浓度分别为0.016 8、0.168、1.68、8.40、42.00、84.00 ?g/mL，芦荟大黄素浓度分别为0.030 4、0.304、3.04、15.20、76.00、152.00 ?g/mL。从低浓度到高浓度，依次进样，每个浓度进样3次，每次20 ?L，按“2.1”项下色谱条件进行高效液相色谱分析，以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程：芦荟苷Y=19 964.74+56219.89X，r=0.999 96，其线性范围为0.000 3