LC―Q―TOF―MS和LC―IT―MS研究酸枣仁汤化学成分.doc

LC―Q―TOF―MS和LC―IT―MS研究酸枣仁汤化学成分 　　摘要： 采用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（LC-Q-TOF-MS）及液相色谱-离子阱质谱（LC-IT-MS）系统剖析了酸枣仁汤中化学成分。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18，Rapid Resolution HT（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）；以乙腈（A）-0.05%甲酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱；流速0.6 mLmin-1；柱温30 ℃。共鉴定了酸枣仁汤中48个化合物，并对化合物的药材来源进行了归属，首次报道了方剂中的31个化合物。LC-Q-TOF-MS结合LC-IT-MS可以简便、快速地对酸枣仁汤中化学成分定性分析，本研究结果为酸枣仁汤质量控制和药效物质基础研究提供了一定的理论依据。 关键词： LC-Q-TOF-MS；LC-IT-MS；酸枣仁汤；化学成分 [收稿日期] 2013-10-10 [基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项（2011ZX09307-002-01） [通信作者] *王书芳， 副研究员， Tel：（0571E-mail： wangsf@zju.edu.cn [作者简介] 朱云祥，硕士研究生，E-mail：zju.edu.cn 酸枣仁汤出自张仲景的《金匾要略[1]，由酸枣仁2 L、茯苓2两、川芎2两、知母2两和甘草1两组成。该方具有养血安神，清热除烦之效。主治发汗后，不得眠睡，或虚劳烦扰，气奔胸中不得眠之症。现代药理学研究发现酸枣仁汤具有镇静催眠、抗抑郁、抗应激、抗焦虑[2-6]等作用，主要用于治疗失眠、抑郁症、躁狂、神经衰弱等[7-8]神经系统类疾病。 目前对酸枣仁汤化学成分研究报道有LC-MS鉴定了27个化合物[9]和液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（LC-Q-TOF-MS）鉴定了24个化学成分[10]。为了更深入研究酸枣仁汤的化学物质基础，本文采用LC-Q-TOF-MS和高效液相色谱-离子阱质谱（LC-IT-MS）对酸枣仁汤中化学成分进行定性分析。 1 材料 1.1 仪器 LC-IT-MS系统：Agilent1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司），配二元梯度泵、PDA检测器、柱温箱和自动进样器；Finnigan LCQ-DECA XPPlus离子阱质谱仪（美国Thermo公司），配电喷雾离子源及Xcalibur l.3控制系统；LC-Q-TOF-MS系统：AcquityTM ultra型高效液相色谱仪（美国Waters 公司）；Triple TOF 5600+型飞行时间质谱，配有电喷雾离子源（美国AB SCIEX公司）； Eppendorf minispan离心机（德国Eppendorf公司）；METTLER TOLEDO XS105分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Agilent Zorbax SB-C18 Rapid色谱柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm），前置Agilent C18预柱；MilliPore超纯水器（美国Millipore公司）。 1.2 试药 酸枣仁（河北，批号120425）、茯苓（安徽，批号120504）、川芎（四川，批号120309）、知母（河北，批号120320）和甘草（新疆，批号120509）药材均购自浙江中医药大学饮片厂。各药材均由浙江大学药学院陈柳蓉副教授鉴定。对照品绿原酸（批号130510）、新绿原酸（批号 130426）、隐绿原酸（批号 130405）、牡荆素葡萄糖苷（批号 111227）和芹糖异甘草苷（批号 121125）均购自上海融禾医药科技发展有限公司，酸枣仁苷A（批号 MUST、酸枣仁苷B（批号 MUST、斯皮诺素（批号 MUST、知母皂苷B-Ⅱ（批号 MUST、知母皂苷A-Ⅲ（批号 MUST、夏佛塔苷（批号 MUST和洋川芎内酯A（批号 MUST均购自成都曼思特生物科技有限公司，甘草查耳酮A（批号 W07-9-4）购自天津中新药业，纯度均大于98%，芹糖甘草苷、新西兰牡荆苷Ⅱ、芒柄花苷、甘草酸和甘草皂苷G2由实验室制备所得，经1H，13C-NMR鉴定；甲酸（Tedia， Fairfield， USA）、乙腈、甲醇为色谱级（Merck， Darmstadt， Germany），LC所用水为Millipore超纯水，其余所用试剂均为分析纯。 2 方法 2.1 供试品溶液的制备 按照金匮要略中酸枣仁汤各药材配比，准确称取酸枣仁117.7 g、茯苓23.8 g、川芎23.8 g