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果蔬中农药残留的酶联免疫分析技术及其展望 摘要：酶联免疫分析法作为快速检测技术中的重要一种，在水果和蔬菜农药残留的快速检测中发挥着重要的作用。本文简单介绍了概述了酶联免疫分析法的技术要点，对其在检测中存在的问题进行了分析，并对其应用前景进行了展望。 关键词：酶联免疫分析法 抗体 抗原 半抗原 抗体抗原结合物 农药残留 The Technology of ELISA （Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）and its perspective in The Detection of Pesticide Residue in Fruits and Vegetables Abstract As a important kind of rapid detection，ELISA plays an crucial role in the pesticide residue of fruits and vegetables. This article simply introduces the essential of ELISA and analyses its problems in the analysis in detections, it also makes a perspective for the application of ELISA. Key Words：ELISA; Antibody; Antigen; Haptens; Conjugate; Pesticide Residue 我国作为世界上最大的蔬菜水果生产国和消费国，仅09年蔬菜的生产就达到了5.9亿吨。果蔬的生产中农药（杀菌剂，杀虫剂，除草剂和植物生长调节剂）的使用不可避免，因此农药残留对人们的健康和环境的污染构成了严重的威胁，也是果蔬消费和贸易中存在的突出问题，越来越引起人们的重视，特别是在进出口贸易中，成为检测的重要指标。农药残留对人体的毒害作用除表现在影响生理活性酶的功能外，还对系统机能构成潜在的危害，甚至会降低机体的免疫功能，表现有致癌、致畸、致突变的作用[1]。对于食品中农药残留的检测，除传统的GC、HPLC、GC—MS、HPLC—MS等方法[2-3]外，免疫学技术的应用也越来越深入，其中应用最广的是以固相载体吸附抗原/抗体为基础的酶联免疫分析法。除了具有传统的仪器检测的灵敏度高，检测精准外等优点外，还有快速，不需要复杂的前处理，检测成本低便于推广等优点，并且能同时进行大批量样品检测。对于水果，蔬菜等特点农产品酶联免疫分析法检测有着重要的应用[3-5]推广意义。在美国，有关官方机构，如环境保护署(EPA)、农业部食品安全检验司(FSIS—USDA)和化学会(AOAC)已制定了农药残留免疫学检验商品试剂盒评定和认可的建议准则[6-7] ，明确了测定结果的法律效力。特别的，美国化学会AOAC已将免疫分析与气相色谱、液相色谱同列为农药残留的三大支柱技术。 1.酶联免疫分析法的原理 酶联免疫分析法（enzamy linked-immunabsorbed assay）简称ELISA，基本原理是将特异的抗原抗体免疫学反应和酶学催化反应相结合，以酶促反应的放大作用来显示初级免疫反应。ELISA是通过在合适的载体上，酶标限定量抗原与未知抗原竞争固相抗体结合位点或固相抗原与未知抗原竞争限定量的标记抗体结合位点，形成抗体复合物。在一定的底物参与下，复合物上的酶催化底物，使其水解、氧化或还原成另一种带色物质。由于酶的降解底物与显色是成正比的，通过分光光度计测定，从而确定是否存在未知抗原或含量[3]。 2. ELISA在农药残留检测中应用的技术要点 ELISA 的核心技术是抗原抗体的特异性反应和酶对底物的催化作用。抗原有两个特性，即免疫原性和反应原性。既具有免疫原性又具有反应原性的抗原称为完全抗原，而只具有反应原性没有免疫原性的抗原称半抗原。免疫原性是指抗原能刺激机体产生抗体，反应原性是指抗体和抗原能进行特异性结合反应。酶与抗体或抗原结合后还要能保持对底物的催化作用。 2.1半抗原的设计合成 农药分子大部分都是小分子物质（分子量小于1000）, 本身不具备刺激机体产生针对农药抗原决定簇的特异性，不能刺激机体产生抗体，必须与大分子载体耦联后才能刺激机体产生抗体，而蛋白质就是大分子物质的最佳选择。 Friei[8]等 认为一个理想的半抗原应包括待测物的特征结构、便于机体对特征结构进行识别的连接臂及其末端可与蛋白载体进行共价连接的功能基团。因此，将农药分子直接和蛋白质偶联或得到最大程度模拟待测农药分子结构特性的合成物质与蛋白质偶联便可以刺激机体产生抗体。他们认为，由于和载体连接后应尽量保证该农药分子获合成分子的特征结构最大程度的被机体识别，