医院输血实验室质量控制和管理制度 人民医院检验科 血库管理人民医院质量管理体系文件.doc

 ABO血型鉴定（盐水法） 1 原理 根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O型4种。可利用红细胞凝集实验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗B。 2 标本采集： 2.1标本种类：采集静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将红细胞用8.5%生理盐水配成5%红细胞悬液。 2.2标本要求：抗凝要求EDTAK2抗凝管或干燥管均可。标本应无溶血，标签填写内容齐全，无涂改。 3标本储存：操作完标本4℃冰箱保存7天。 4标本运输：室温运输。 5 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本标签填写内容不齐全或有涂改、标本量太少不能作检测。 6试剂 6.1试剂Ⅰ名称：ABO血型定型试剂（人血清） 6.2试剂Ⅰ生产厂家：中国医学科学院输血研究所、四川协和生物技术有限责任公司 6.3试剂Ⅰ组成 试剂1.抗-A血清，效价256，2-8℃避光保存，有效期为一年，在效期内使用。 试剂2.抗-B血清，效价128，2-8℃避光保存，有效期为一年，在效期内使用. 6.4试剂Ⅱ名称：人ABO血型反定型红细胞试剂 6.5试剂Ⅱ生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司 6.6试剂Ⅱ组成：A1、B及O型试剂红细胞盐水悬液。 7仪器 7.1离心机：80-2上海手术器械厂 7.2电热恒温水箱：上海医疗器械厂 7.3显微镜：OLYMPUS(日本) 8操作步骤及结果判断： 8.1试管法 8.1.1 取洁净小试管（内径10mm*60mm）3支，分别标明抗-A、抗-B和抗-A+B，用滴管分别加抗-A、抗-B和抗-A+B。分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。 8.1.2另取洁净小试管（内径10mm*60mm）3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。 8.1.3立即以1000r/min离心1min。 8.1.4将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。 如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 8.1.5观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。 8.1.6凝集强度判断标准 4 + = 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3 + = 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。 2 + = 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。 1 + = 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 +/- = 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。 MF = 混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍成分散分布。 — 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。 8.1.7按表1-6-1报告受检者红细胞ABO血型 8.2玻片法 8.2.1取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A+B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A+B分型血清2滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混合。 8.2.2另取洁净玻片一张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清2滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 8.2.3将玻片不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。如以玻片作试验时，也可用低倍镜观察结果。 表1-6-1 ABO血型正反定型结果 分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+试剂红细胞 抗-A 抗-B 抗- A+B A细胞 B细胞 O细胞 + – + A – + – – + + B + – – – – – O + + – + + + AB – – – 注：+ = 凝集； — = 不凝集 9操作性能：快