单克隆抗体与杂交瘤技术.ppt

单克隆抗体与杂交瘤技术 （Monoclonal Antibody, McAb Hybridoma Technique) 基本概念 抗原（antigen,Ag）凡能诱导免疫系统发生免疫应答，并能与其诱导产生的抗体或效应细胞在体内或体外发生特异性反应的物质，就称为抗原。 抗原的特性： 免疫原性（immunogenicity）或抗原性（antigenicity） 抗原能刺激特定的免疫活性细胞，使之活化、增殖、分化，最终产生免疫效应物质（抗体或效应细胞）。 反应原性（reactogenicity）或免疫反应性（immunoreacticity） 抗原可在体内外与相应的免疫反应产物发生特异性结合。 完全抗原（complete antigen）:凡是具有免疫原性和反应原性的物质称为完全抗原。如大多数蛋白质、细菌、病毒等。 半抗原（hapten）或不完全抗原（incomplete antigen）:只具有反应原性而无免疫原性的物质称为半抗原。 半抗原可与相应抗体结合，具有反应原性。 半抗原+载体 → 完全抗原 半抗原多为简单的小分子物质，分子量小于4KD，如多糖、类脂、某些药物。 免疫球蛋白（immyoglobulin,Ig）:具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。 抗体（antibody,Ab）：由抗原刺激机体产生并与抗原发生特异性结合的Ig，表现高度的多样性。 抗体都是免疫球蛋白，而免疫球蛋白并不一定都是抗体 （如骨髓瘤蛋白）。 免疫球蛋白的基本结构 基本结构：四肽对称结构 1、重链和轻链 重链（heavy chain,H链）： 分子量50,000Da,由440个氨基酸残基组成； 根据重链化学结构和抗原性的差异,将Ig分为G、M、 A、D、E五类。 轻链（Light Chain，L链）： 分子量 25,000Da，由214个氨基酸残基组成； 根据轻链化学结构和抗原性的差异将Ig分为K型和λ 型。 2、恒定区和可变区 恒定区（Constant region）：简称C区，位于L链近C端的1/2和H链近C端的3/4区域，这一区域的氨基酸组成和排列顺序比较稳定。H链和L链的恒定区分别称为CH和CL。 可变区（variable region）：简称V区，位于L链近N端的1/2区域和H链近N端的1/4区域，这个区段的氨基酸组成及排列顺序是可以变化的。H链和L链的可变区分别称为VH和VL。 高变区（ hypervariable region ）：简称HVR，是V区中氨基酸的组成和排列顺序变化频率更高的区域，也是抗体与抗原决定簇结合的部位，又称为决定簇互补区（ complementary-determining region,CDR）。 骨架区（framework region,Fr）：在VH区中非HVR区部位的氨基酸组成和排列相对恒定保守，称为骨架区。 3、铰链区（hinge region）: 介于CH1和CH2功能区之间。 特点： 富含脯氨酸，易于伸展弯曲； 易被蛋白酶水解； 不易形成a螺旋。 作用： 有利于抗原抗体结合 暴露补体结合部位 Ig功能区：每条肽链可被链内二硫键连接折叠成几个球形结构，这些球形结构具有不同的生物学功能，称为功能区（domain）。 L链功能区：VL和CL H链功能区：IgG、IgD、IgA——VH、CH1、CH2、CH3 IgM、IgE——VH、CH1、CH2、CH3、CH4 功能区的作用： VL和VH——抗原特异性结合部位 特点： 1. 高度的匀质性： 氨基酸排列序列、空间构型 理化性质 2. 高度的特异性：单个抗原决定簇 3. 来源稳定、重复性好，易于实验标准化和大 量制备： 经抗原免疫的B淋巴细胞能够产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖； 骨髓瘤细胞——一种浆细胞肿瘤——易于建立细胞系，在体外培养中能够无限繁殖，不分泌特异性抗体； 将这两种细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特点，既保存了骨髓瘤细胞无限迅速增殖的特性，又继承免疫淋巴细胞合成、分泌特异性抗体的能力。 1975.8.7，Kohler和Milstein在《nature