口蹄疫非结构蛋白研究进展.doc

 本栏目主持人: 袁丽萍 ylp652@ 口蹄疫非结构蛋白研究进展 朱咏梅 1，朱来华 2，郑小龙 2，王宫璞 2，王 琰 2 （1. 青岛出入境检验检疫局，山东青岛 266000；2. 山东出入境检验检疫局，山东青岛 266002） 摘 要：口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒引起的在偶蹄动物间传播的烈性传染病，大多数发展中国家 采取免疫接种来控制该病或建立无疫区，如何区分自然感染动物和免疫动物一直是控制和消灭该病的重要问题。大量的比较研 究一致认为，以 FMDV 非结构蛋白（non-structural protein，NSP）为抗原，检测动物体内的 NSP 抗体是一种很好的区分感染动物和 疫苗免疫动物的诊断方法。但因疫苗中残留的 NSP 或非特异性应激因素亦可引起假阳性反应，许多国家特别是泛美地区普遍联 合采用 3-ABC-ELISA 或酶联免疫电转印试验（Enzyme-Linked Immunoelectrotransfer Blot Test，EITB），并得到了 OIE 的认可，已 成功应用于南美国家口蹄疫扑灭计划。 关键词：口蹄疫病毒；非结构蛋白；鉴别诊断 中图分类号：S852. 659. 6 文献标识码：A 文章编号：1005-944X（2011）05-0083- 04 FMD 是由 FMDV 引起的偶蹄类动物烈性传染 病，世界动物卫生组织（OIE）将其列入必须通报的动 物疫病。该病传播快、宿主范围广、发病率高，对畜牧 业发展构成极大威胁。近年来我国畜牧养殖业发展迅 速，口蹄疫是重大的潜在威胁。与发达国家通常采取 的扑杀政策不同，发展中国家普遍采用免疫的方法来 控制该病。因此，如何快速、可靠地区分免疫动物和感 染动物，对于 FMD 的防制以及国际贸易尤为重要。 基于动物感染 FMDV 后，既能产生结构蛋白抗 体，又能产生 NSP 抗体，而疫苗免疫动物主要诱导机 体产生 FMDV 结构蛋白抗体，与结构蛋白相比，非结 构蛋白的变异较少，相对保守[1]。在 FMD 诊断中，区 分免疫动物和自然感染动物是一项十分重要的内容， 鉴别自然感染动物和免疫动物也是 OIE 判定一个国 家有无 FMD 流行的依据。近年来，陆续建立了检测 FMDV NSP 抗体的诊断方法，以区分 FMDV 感染动 物和注射疫苗动物。以下就 FMD 中 NSP 的研究进展 综述如下。 1 FMDV 相关 NSP 的种类 FMDV 的 NSP 是指除了衣壳蛋白 1A、1B、1C、 1D 和它们的前体蛋白之外的所有由病毒编码但不参 与病毒衣壳组成的蛋白，包括成熟蛋白 L、2A、2B、 2C、3A、3B、3C、3D 以及它们的前体。NSP 参与病毒 的复制、多聚蛋白的裂解和病毒颗粒的组装过程。其 中 L 和 3C 能抑制宿主细胞的蛋白合成，在病毒蛋白 的成熟裂解过程中作为蛋白酶裂解聚蛋白，2A 为 P1/2A 间裂解提供识别序列 2BC、2C、3AB 和 3CD 形 成复制复合物，为病毒 RNA 的合成创造条件，与装 配有关[1]。 1966 年 Cowan 等[2]发现一种病毒非结构蛋白抗 原（即 3D）仅与感染动物血清反应，由此建立的免疫 扩散试验与动物食道咽部病毒分离技术相结合，曾被 认为是一种可靠的鉴别诊断方法。但后来发现，反复 接种灭活疫苗的动物体内会不同程度地产生抗 3D 抗体，该方法受到质疑。近年来，开始研究用其他非结 构蛋白取代 3D 来区分注苗动物和感染动物。Berger 等[3]研究发现，血清中存在 NSP 抗体可以作为感染 FMD 康复动物的标志，若血清中同时存在至少 2 种 NSP 抗体 （3D 抗体除外） 就可以断定该动物感染过 FMDV，但如血清中不存在一种或所有的 NSP 抗体， 并不能肯定该动物从来就没有感染过 FMDV。 Rodriguez 等[4]对感染 FMDV 的猪和疫苗接种猪 体内的 NSP 免疫原性及特异性进行了研究，发现 3ABC 抗体是由活 FMDV 在体内诱导产生的，因此 3ABC 最适合用于鉴别 FMDV 感染猪和疫苗接种 猪，并指出抗 3ABC 抗体在感染后 2 周即可检测到。 Lubroth 等[5]发现，血清中 2C 和 3ABC 抗体的存在可 作为区分 FMD 恢复动物（带毒者）和疫苗接种动物。 Mackey 等[6]指出，2C、3A、3ABC 抗体的存在也可以 作为鉴别感染和疫苗接种动物的指标，并且对于牛和 猪血清，3ABC 是最为可靠的、可单独使用的指标。抗 3ABC 抗体在感染后早期就出现，并且在血清中维持 可被检测水平的时间比任何其他的 NSP 都长[7]。 20 世纪 90 年代以来，各国研究者通过对 2C、 3A、3ABC