第8章 细菌的遗传分析.ppt

In specialized transduction, DNA near the site of phage integration on the bacterial chromosome is transferred from one bacterium to another. * * 进行转化的一般步骤： 1）提取供体的DNA并进行纯化； 2）断裂成小的双链DNA片段； 3）加到受体细菌的培养液中。 供体的DNA片段被受体细胞所接受，同源区发生重组最后使受体基因型发生变化。 双链DNA的转化过程 在转化时： ①一般要对受体细胞进行处理：化学处理或用强电场处理（电穿孔）。目的是增加受体细胞膜对供体DNA的可透性。 ②制备感受态细胞：能吸取DNA分子而被转化的细菌细胞叫做感受态细胞。在某一细菌群体中，只有极少数细胞是感受态的，它们具有感受因子，可能是细胞表面的一种蛋白质或是一种转化酶，它参与DNA的吸收。 2、转化与作图 通过转化可以测定基因连锁、基因顺序和图距。 1）基因连锁关系的确定 相距很远的二个基因很难同时存在于一个DNA片段中，若两个基因的二个片段同时进入受体，一般不能同时进行转化的。两个基因紧密连锁时，它们就有较多的机会包括在同一个DNA片段中，并同时整合到受体染色体里——共转化（cotransformation），共转化的基因一般是连锁的。（见图8.21） 2）基因顺序的确定 例如：如果基因p和q常常一起传递到受体，这样两个基因可能是相对地紧密连锁，同样基因q和基因o也经常一起传递到受体细胞。这两个基因也是彼此连锁的。 理论上这3个基因有两种可能的顺序：p-o-q和p-q-o。若顺序是p-o-q，这样p和o必将共转化,因为它们比p和q靠得更紧密。结果表明没有p和o的共转化，说明基因顺序肯定是p－q－o。(见图8.4） 3）图距的测定 例1：在一个转化实验中，用a+b+品系的供体DNA，转化基因型ab的受体品系，得到的转化类型和数目： a+ b+ 307 a+ b 215 a b+ 278 转化子的总数是800，(用a+作为选择)问b位点与a位点共转化的频率是多少？ ? 解：a+基因与b+基因共转化的频率用整个a+转化子数目以及a+和b+转化子数目的值来计算。 a+ b+共转化子数307，a+转化子有两种a+b+（307）和a+b(215)总数是522。ab+类型与所提问题不相关，因为对于a+来说它们不是转化子，所以a+和b+共转化的频率是：307/522×100％＝58.8% ×100% 例2：用枯草杆菌的一个菌株trp2+ his2+ tyr1+作 供体，提取DNA，向受体trp2- his2- try1-菌株进行了 转化，得到转化子类型如下： 座位 转 化 子 类 别 trp2 ＋ － － － ＋ ＋ ＋ his2 ＋ ＋ － ＋ － － ＋ try1 ＋ ＋ ＋ － － ＋ － 数量 11940 3660 685 418 2600 107 1180 问基因间的重组值如何？三个基因的次序如何？ 解：在转化体中数目最多的是三个座位同时被转化的类别，这说明trp2、his2和tyr1三个座位在染色体上靠得很近，需要强调的是在计算trp2-his2之间的重组值时，trp2- his2-座位看成没有机会和带有这两个基因的供体DNA片段相遇的细胞，计算时不能考虑（按同样道理相反的— —重组子都不能计算在内，即相反的重组子不存在）。 RFtrp2－his2=(3660＋418＋2600＋107) /