对胆红素的再认识.ppt

对胆红素的再认识--从结构到功能 内容提要 胆红素的新分类法及δ胆红素 胆红素检测的方法及其影响因素 对胆红素功能的新认识 胆红素研究历史 1942 年，德国化学家Hans Fisher 首次报道了胆红素的化学结构，他对胆红素前体-血胆红素的全合成研究工作使他在1930 年获得了诺贝尔化学奖 胆红素的来源和生成部位 来源：一切含血红素的血色蛋白，如血红蛋白、细胞色素和肌红蛋白 生成部位： 主要（70%-80%）：衰老的红细胞在肝脏、脾脏和骨髓中的单核-巨噬细胞系统 次要（10%-15%）：肝内血色蛋白如P450、B5过氧化氢酶的分解和脾脏、骨髓内未成熟红细胞的分解，亦称旁路胆红素 胆红素的传统分类法 直接反应胆红素(direct-reacting bilirubin） 能在水溶液中与重氮磺胺酸直接起反应 间接反应胆红素(indirect-reacting bilirubin) 需要诸如乙醇、甲醇、咖啡因、安息香酸钠等促进剂才能与其他试剂反应 血清胆红素的必威体育精装版分类法 α胆红素/非结合胆红素/游离胆红素 unconjugated bilirubin，Bu β 胆红素/ 一元葡糖苷酸胆红素monoglucuronide bilirubin，mBc γ 胆红素/二元葡糖苷酸胆红素 diglucuronide bilirubin，dBc δ胆红素/与白蛋白的配合物（共价结合）/胆蛋白 Albumin-bilirubin complex，B δ 两种分类法的对应关系 间接胆红素（IB）= α胆红素=非结合胆红素 直接胆红素（DB）=结合胆红素+ δ胆红素 结合胆红素= β 胆红素+γ 胆红素 光照对胆红素结构的影响 胆红素经400～500nm 波长的蓝光(绿光) 照射后，内侧氢键断开，其1 个或2 个吡咯环旋转180°，形成3 种E 构型的异构体，具有水溶性，可从胆汁直接排泻 形成不可逆的环形化合物(环胆红素) ，清除很快，T1/ 2为2 h ,是新生儿黄疸病人光疗后，在十二指肠和尿中排出的主要胆色素 形成几种水溶性的无色产物，产生慢，量小 新生儿黄疸光照疗法的分子基础 结合胆红素的结构 胆红素在血液中的存在形式 作为运输载体，可以进入血液循环到达肝脏 血浆白蛋白浓度： 500~700umol/L 血浆胆红素浓度：3~17umol/L 变脂溶性为水溶性，阻止胆红素过进入血脑屏障和透过细胞膜。 松散的结合，非共价结合！ 影响胆红素结合白蛋白的因素 pH环境和钙离子 某些阴离子药物： 磺胺类抗菌素、巴比妥和水杨酸盐、 游离脂肪酸、胆道造影剂等 白蛋白的分子浓度：过低导致结合不牢固！ δ胆红素（胆蛋白）的特性 与白蛋白以酰胺键共价结合，二者不可分解 具有良好的稳定性，半衰期为17-23天 不被肝细胞摄取，不能通过肾小球，不经胆汁排出 85%与重氮试剂呈直接反应 仅用干化学法能检测到，湿化学法检测不到 δ胆红素可能的来源与形成机制 来源：结合胆红素 形成机制：当结合胆红素升高时，超过肾阈值，返流回血液的结合胆红素在非酶促条件下与白蛋白结合形成的产物。胆汁淤积会加快δ胆红素的形成 δ胆红素的结构 δ胆红素的结构 δ胆红素存在的意义 有助于理解临床其他指标好转但黄疸不退的原因 用测Bc代替传统DB测定，更加直接地了解病情 计算Bδ/TBIL有助于判断恢复期肝病的预后 在正常人以及高Bu病人（新生儿黄疸）中缺乏，仅在那些酯型高胆红素血症的病人血清中被检测到 胆红素的检测方法研究进展 湿化学法：反应均在液体试剂中进行 重氮反应法、 氧化酶法、 化学氧化法 干化学法：反应在干式试剂片上进行，无液体试剂 Kodak建立薄膜分析技术( thin film analysis) 其他：高效液相色谱法（HPLC）、分光光度法、荧光探针法、单克隆抗体法、传感器法 重氮法检测胆红素（一） 原理：血清中DB可直接与重氮试剂反应产生偶氮胆红素，Bu测定时则要以咖啡因、苯甲酸钠为加速剂破坏胆红素氢键，再与重氮试剂反应。（DB包含Bc和大部分Bδ） 种类：改良J-G法、M-E法、P-L法 重氮法检测胆红素（二） 优点：可直接比色，手续简单，易于自动化 缺点：重氮试剂不稳定，须由亚硝酸钠和氨基苯磺酸临时生成；重氮试剂与Bu和Bc的反应特异性不佳，在一定条件下测Bc，一部分Bu参与反应；易受溶血、脂血等因素干扰；胆红素浓度过高时影响准确度（稀释） 氧化酶法检测胆红素（一） 原理：胆红素氧化酶（BOX）催化样品中的胆红素氧化，生成胆绿素，引起450 nm 处吸光度(A450 nm )值下降。通常条件下（pH值 3.7~4、NaF存在），BOX 试剂只与Bc 反应，与Bu 与Bσ不起反应；改变条件（