不同条件下水解酪蛋白所得到的抗菌肽抑菌效果比较.docx

!#$##，XC2E$’，SCE$食品科学!营养卫生不同条件下水解酪蛋白所得到的抗菌肽抑菌效果比较胡志和，庞广昌，陈庆森，刘碧帆(天津商学院食品科学与工程系，天津##!’*摘要：本文采用胰蛋白酶水解酪蛋白制备抗菌肽，针对不同底物浓度下，改变酶与底物浓度比，水解产物的抑菌活性随着水解度的变化情况进行对比。确定了在’+,时该反应的最适底物浓度是-.（/012）；最佳酶与底物浓度比为!3!$#。同时，通过在不同水解时间取点，发现水解所得到产物的抑菌强度随水解度的增大而增大。关键词：抗菌肽；酪蛋白；胰蛋白酶；抑菌强度!#$%’$：456789:%;796=:7269:?6@7A=67=6?;B5B?=C2BD:8/7A6:8@:959=BA:8E956=6279:C8A5:;6F9@668?:GG6=6895B?=C2BA:AC8?:9:C8A78?789:%;796=:726GG69ACG5B?=C2BA796A?6=:H6?G=C1?:GG6=6895BF?=C2BA:AC8?:9:C8A@7AA9I?:6?E456=6AI29AA5C@6?J7A9569616=79I=6@7A’+,K956C9:1I1C8?:9:C8AGC=5B?=C2BA:A@6=6J956C8689=79:C8CG7A6:8AC2I9:C879-.78?956=79:CCG68DB1678?7A6:879!3!$#EL678@5:26K@672ACGCI8?9579956789:%;796=:726GG69CG5B?=C2BD796=7:A6?@:95=:A:8/?6/=66CG5B?=C2BA:AE()*+,%-#：789:;:C9:69:?6AM7A6:8M9=BA:8M789:%;796=:726GG69中图分类号：N)!’O-文献标识码：P文章编号：!##$%QQ#($##*#$%#!#%#+抗菌肽的发现起源于对昆虫免疫机制的研究，当昆虫受到外界刺激时，发生免疫应答反应，在体内诱导产生出具有强烈抗菌活性的物质，抗菌肽是其中重要组成成分。多肽抗生素研究的真正兴起是从 $#世纪)#年代初开始的。!-)#年，RC178等人从美国天蚕蛹中分离得到了具有抗菌活性的多肽———6=C:8A，并于次年在《S79I=6》上公布了其氨基酸序列。同年T6GI=等人从兔的巨噬细胞中分离到了另一种多肽抗生素—?6G68A%:8A，并于年后公布了其氨基酸序列。此后数年间，人们相继从细菌、真菌，到两栖类、昆虫、高等植物、哺乳动物、直至人类体内，发现了多肽抗生素。目前，仅昆虫来源的多肽抗生素，就已达!#余种。随着对抗菌肽结构与功能、抗菌肽%生物膜相互作用机理、抗菌肽基因的分子生物学、抗菌肽基因工程等研究的深入进行，抗菌肽在医疗、农业等领域显现出广阔的应用前景。由于抗菌肽具有着广泛的生物学活性，且应用前景广阔，所以人们开始日益重视如何制备抗菌肽并将其投入工业生产。目前，抗菌肽的制备主要有以下几种方法：天然抗菌肽的分离提取M化学合成法U!VM基因工程合成法U$VM酶解法UV。几种方法的比较，由于酶作用本身的特点，再加上采用固定化酶的技术，使得该成本低且便于操作的方法更易于实现工业化生产。长期以来，酪蛋白只被认为是幼年哺乳动物氨基酸的主要来源。除了营养作用之外，酪蛋白的生理活性一直未受到足够的关注。直到!--年人们发现了动物体内村吗啡肽之后U’V，才开始了外源活性肽这一领域的研究。而其潜在的抗菌活性则一直到!-)$年 才被广泛认知U+V。随着其日渐成为动物营养学和生理学界研究的热点，人们从中检测到了具有阿片活性、免疫调节活性、降血压活性、抗凝血活性、促进矿物吸收活性，促进WSP合成活性及抗细菌活性等UQV多种生物活性肽。本研究是用胰蛋白酶水解牛乳酪蛋白制备抗菌肽，并对不同的水解条件下水解得到的抗菌肽的抗菌活性进行了研究。!材料与方法!E!主要原料胰蛋白酶(P1=6AC进口分装K上海华美生物工程公司K电泳纯*；酪蛋白(化学纯*(军事医收稿日期：$##$%#%!’基金项目：天津市重点基金项目(##)#’#!!*作者简介：胡志和，男，’#岁，副教授，主要从事蛋白质中生物活性物质的制备和分离等研究。!营养卫生食 品 科学#$$，%’(#)，*(#!!学科学院天津东方卫生材料厂+；营养琼脂,化学纯+,天津市珠江卫生材料厂+；大肠杆菌（!#$%），天津商学院微生物教研室保藏。!(#主要方法!(#(!抗菌肽的制备首先，将颗粒状的牛乳酪蛋白研磨成粉末，配制成所需浓度的溶液，然后，用!$-,./0+的*123溶 液缓慢调整溶液的4356，放入)78水浴锅中温浴至溶液温度达到)78后，向酪蛋白溶液中加入新鲜配制的胰蛋白酶溶液，在)78条件下酶解#9。酶解过程中，由于肽键断裂而不断有羧基释放，体系的43值不