复合酶协同微波处理提取紫背天葵叶片总黄酮工艺.docx

复合酶协同微波处理提取紫背天葵叶片总黄酮工艺崔蕊静1申淑琦2郭朔1（1河北科技师范学院食品科技学院河北秦皇岛0660042河北农业大学海洋学院河北秦皇岛066003）摘要目的：以紫背天葵叶片为原料，研究复合酶（纤维素酶和果胶酶）协同微波处理提取紫背天葵叶片中黄酮类物质，以及每个叶期不同叶片中黄酮类物质提取的工艺条件。方法：采用单因素及正交试验对复合酶水解后 微波提取与直接微波提取总黄酮的效果进行对比试验。结果：将紫背天葵叶片50℃烘干，粉碎过80目筛，料水比1∶15（W∶V），加入0.2%果胶酶和0.05%纤维素酶，55℃水解40min，再加入体积分数60%乙醇作提取剂，料液比1∶30，微波功率360W，温度70℃下处理20min后，所得浸提液中总黄酮含量比直接微波处理提高近30%。紫背天葵不同叶期、不同叶片黄酮类物质含量的规律为展开叶和成熟叶中总黄酮含量较高，幼叶次之，老叶中最低。结论：优化的工艺简便可行，提取率高，为紫背天葵黄酮类物质提取工艺的产业化提供理论依据。关键词紫背天葵叶；复合酶；微波；提取；总黄酮文章编号1009-7848（2014）02-0072-06紫背天葵（BegoniafimbristipulaHance），植物学分类属菊科（Compostitae）三七草属的多年生宿根草本植物，是1种药食兼用的保健品[1-2]。《全国中草药汇编》记述，紫背天葵有治咳血、血崩、支气管炎、盆腔炎、中暑、阿米巴痢疾和外用创伤止血等功效。紫背天葵中黄酮类物质含量较高，具有抗氧化、降低脂质过氧化反应、预防心血管疾病、抗 衰老、抗自由基和抗癌、防癌的等作用[3-5]。从药用植物提取具有生理活性的黄酮作为天然药物、保 健品和化妆品等行业的原料，已日益引起重视。黄 酮类化合物的提取和分离方法也得到深层次的研究和开发，已有的方法将会日趋成熟和完善，各种高效、方便快捷的新方法将会不断涌现[6]。微波处理因促进反应的高效性、强选择性、操作简便、副 产物少、产率高及产物易提纯等优点，已经被广泛应用[7-9]。本文采用反应条件温和、对水解物不会产 生破坏的酶水解工艺，协同乙醇溶液作浸提剂，对 紫背天葵进行微波处理，探讨微波辅助处理对紫背天葵中黄酮类物质的浸提特性的影响，旨在为紫背天葵黄酮类物质提取工艺的产业化提供理论依据。收稿日期：2013-02-22作者简介：崔蕊静，女，1966年出生，硕士，教授1材料与方法1.1原辅料紫背天葵（BegoniaFimbristipulaHance），河北科技师范学院园艺园林系实验基地提供；芦丁对 照品（批号100080-200808），中国药品生物制品鉴定所；硝酸铝、亚硝酸钠、乙醇、氢氧化钠、丙酮、 甲醇等均为分析纯时间。1.2设备与仪器723型紫外-可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司分光仪总厂；WD900B微波炉，顺德市格兰仕电器实业有限公司；JFSD-70粉碎机，上 海嘉定粮油仪器有限公司；DHG-9245A电热鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司。1.3测定方法采用分光光度法。先用芦丁对照品配制标准溶液，于510nm光波长处比色定量测定，制备标准曲线，然后根据样品的吸光度求出黄酮含量，再 调整各种因素，求出最佳试验条件[10-11]。1.4标准曲线的建立[12]准确称取芦丁试剂15mg，用60%乙醇定容 到100mL。准确量取芦丁溶液0.0，1.0，2.0，3.0， 4.0，5.0mL，分别置于10mL容量瓶中，用60%乙 醇定容至5mL，各加入5%NaNO2溶液0.3mL， 放置6min，再加入10%AI（NO3）3溶液0.3mL，放置6min，然后加入4%NaOH2mL，蒸馏水定容，静置15min，每一步都充分混匀。以第1个容 量瓶作参比，在510nm处测定吸光度，绘制标准曲线。建立的标准曲线方程：C=0.0772x+ 0.0007，r=0.99948，其中c代表吸光度，x代表溶液浓度（图1）。芦丁质量浓度/mg·mL-10.080.070.060.050.040.030.020.01000.1880.3730.5670.7540.98吸光度（A）图1芦丁标准曲线Fig.1Standardcurveofrutin针对试验所制得样品，用分光光度计测得其吸光度，利用回归直线方程，计算样品中黄酮类物 质的含量。1.5样品中总黄酮含量测定[13]将紫背天葵洗净、烘干、粉碎，过80目筛。准 确称取1g样品，提取后计量总体积，用相应浓度的乙醇定容至100mL，然后从中量取1mL溶液 置10mL容量瓶中，加入0.3mL5%NaNO2，摇匀放置6min，再加入0.3mL10%Al（NO3）3，放置6 min后加入2mL1%NaOH显色，最后用30%乙 醇定容，静置15min，在510nm处测吸光值。Y（%）=（